Secuenciación del gen de lanosterol 14-α-demethylase (ERG11) en Candida Albicans: resistencia a los Azoles

Secuenciación del gen de lanosterol 14-α-demethylase (ERG11) en Candida Albicans: resistencia a los Azoles

RESUMEN:
Candida albicans es una especie de levadura y es un agente patógeno responsable por la candidiasis, una condición presente en la mayoría de los casos en personas con inmunosupresión, comprometiendo la vida. Para el tratamiento de la candidiasis se ha usado normalmente azoles,una clase de antifúngicos capaces de inhibir la 14-α-lanosterol desmetilasa, expresada del gen ERG11, provocando la lisis de las bacterias. Este tratamiento no siempre es efectivo debido a que C. albicans muta en hot spots del gen ERG11 confiriendo la resistencia a los azoles. El presente estudio llevó a cabo una extracción de ADN, seguida por la amplificación, purificación y secuenciación con elfin de comprobar la presencia de mutaciones en la región específica ERG11.
Al correr una electroforesis de los resultados se obtuvo una región amplificada con un peso de alrededor de 407 pb según los cálculos. Y, comparando la secuencia de nucleótidos en la base de datos de NCBI se obtuvo un 100% de identidad con el gen ERG11, por lo que no se evidenció alguna mutación.
Al no haberobtenido ninguna mutación no se pudo realizar un estudio profundo del cambio de la 14-α-lanosterol desmetilasa que impide ser inhibida por azoles.

PALABRAS CLAVE: Candida albicans, ERG11, Azoles, mutaciones, resistencia.

INTRODUCCIÓN
El microorganismo Candida albicans es un patógeno oportunista, clasificado por su forma de reproducción como un hongo diploide asexual. En el ámbito clínico, estalevadura es la causante de una infección conocida como candidiasis que compromete mucosas, principalmente aquellas asociadas a la cavidad oral, al intestino y a la vagina, aunque también suele presentarse en la piel (Cashmore et al.,2000) . A pesar de esto, la manifestación patógena de Candida albicans solo aparece en circunstancias en las que el organismo anfitrión se encuentra inmunosuprimidoy, esta micosis puede llegar a comprometer la vida del mismo. Dentro de su sintomatología se encuentran inflamación, enrojecimiento, ardor e irritación en los tejidos afectados.
Para su tratamiento, tradicionalmente se han empleado antifúngicos variados. Uno de los más comunes es el fluconazol que ataca a la enzima 14-alfalanosteroldemetilasa. La función principal de los azoles es la inhibiciónde la formación de la membrana celular de Candida albicans debido a que impiden la adecuada expresión del gen ERG11 que codifica para la enzima 14-a-esterol desmetilasa que se encarga de la conversión de lanosterol a ergosterol, determinante para la formación de las membranas plasmáticas de las células del patógeno. De esta manera, la proliferación y estadío del microorganismo en el anfitriónhumano se estanca. Sin embargo, se ha demostrado experimentalmente el surgimiento de nuevas cepas de Candida albicans que presentan resistencia al tratamiento con azoles. Esto, quizá, debido a la presencia de hot spots en el genoma de la levadura, lo que le confiere una alta tasa de mutación en algunos sitios más que en otros (Benzer, 1955) .
Un estudio relativo al tema es Cloning of Candida albicansgenes conferring resistance to azole antifungal agents: characterization of CDR2, a new multidrug ABC transporter gene (Bille, Ischer, Monod & Sanglard, 1997) en el cual se relaciona la resistencia de la levadura con el posible daño de los genes CDR1 y BEN que codifican para transportadores membranales fundamentales para el ingreso de azoles al interior celular. Para demostrar lo anterior, losautores realizan un procedimiento que incluye la prueba de la sensibilidad de Candida albicans con distintos medicamentos, la construcción de plásmidos, secuenciación, transformación de la levadura y electroforesis.
Otro estudio que une tanto la influencia de los transportadores membranales y las alteraciones en la enzima 14-αlanosteroldemetilasa se titula Resistencia de Candida albicans a los...