Secuenciación del trascriptóma
El transcriptoma se define como el conjunto de ARN mensajero resultante de la traducción del genoma bajo determinadas condiciones.
La anotación de genomas consiste en: Agregarinformación, de la manera más confiable y actualizada que se pueda para describir una secuencia. Es información asociada a coordenadas genómicas (comienzo..fin), a distintos niveles e interpretar lainformación cruda de secuencia en un marco biológico.
Planteamiento del Problema.
En microbiología clínica existen algunas bacterias cuya identificación resulta imposible, dificil o requiere muchotiempo.
Justificación.
Es por eso que la identificación molecular basada en el rRNA 16s ha permitido la identificación de nuevos agentes patógenos y con el paso del tiempo la utilización de estatécnica tendrá una mayor aplicación en el campo de la microbiología clinica.
Objetivos.
Estudiar las técnicas de secuenciación del trascriptoma y como sus aplicaciones para en diagnostico en lamicrobiología clínica. Así como la posterior anotación de estos genomas en las distintas bases de datos disponibles en la web.
Antecedentes.
Desde que Holley secuenció un tARN para Alanina en 1965,se han desarrollado métodos de secuenciación de ARN similares a los utilizados para secuenciar ADN.
Desarrollo.
Secuenciación del Trascriptoma
La secuenciación del RNA básicamente se divide endos categorias:
•
Métodos directos
Consiste en la extracción del mRNA y su posterior conversión en cDNA mediante la RT-PCR; y la secuenciación con métodos convencionales.
Figura
1.1.Diagrama del
de
la
conversiión
mRNA cDNA
mediante RT-PCR.
•
Métodos indirectos
•
Métodos indirectos.
1. Método enzimático: Se utiliza un iniciador marcado con 32P y latranscriptasa reversa. Se generan fragmentos de cDNA con una
terminación específica dada por ddNTPs. Se resuelve el orden de los fragmentos de DNA generados en un gel de acrilamida.
2. Métodos...
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