SECUENCIACI N DEL ADN

Universidad Nacional Autónoma de México
Facultad de Medicina
Licenciatura en Ciencia Forense
Secuenciación del DNA
Corona Plascencia Viridiana
Espinosa Sánchez Magali
Gómez Sánchez Saúl
GonzálezMeza Michelle
Ortiz Rodríguez Aidee
Serrano Aguilar Claudia

¿Qué es la secuenciación?
Determinar el orden en que se enlazan las
bases nitrogenadas
Trozo de DNA:
Gen
Genoma
Una parte de ellos

Un pocode historia…
15 años después
del descubrimiento
del ADN

Propiedad químicas
similares de moléculas
Inabordable una
secuenciación completa
Desconocimiento de
ADNasas especificas.

Primerasecuenciación de
ac. nucleicos

Holley (1965) de
ARNt de E. Coli

Enzimas de
restricción tipo II

1970

1977. Maxxam
y Gilbert

1970. Fredererik
Sanger

“Método
químico”

“plus minus”

Secuenciación
defragmentos
de ADN

ADN polimerasa
de E. Coli

Reconocen y cortan
ADN en secuencias
especificas

Método para
fragmentar en
piezas pequeñas
Método
enzimático

Método químico vs Método enzimático

Utiliza DNApolimerasa





Para romper zonas específicas de las cadenas




Altamente tóxicos y altamente cantidades de ADN
marcadas radiactivamente

Pocos reactivos tóxicos y cantidades menores deradiactividad




Degradación de ADN




Mas complejo

Utiliza ADN directamente




Conservación de ADN
Mas fácil de utilizar

Cada comienzo de lectura requiere la clonación
de ADN

Secuenciaciónquímica…
18M
hidracina y
2M NaCl

1. Cortes
en
Citosinas

2. Corte
de
Adeninas
y
Guaninas

4. Clivaje
en
Citosinas
y Timinas

18M
hidracina

50mM dimetil
sulfato

3. Patrón
de
bandas +
++ G y +A

90°C ypH
neutro

Secuenciación enzimática
Basado en
Didesoxinucleótidos (ddNTP)
Impide que otros
nucleótidos se unan a él
deteniendo la replicación
del ADN.

Didesoxinucleótidos (ddNTP)
Moléculas similaresa los
nucleótidos pero les falta un grupo
de –OH

Se aísla y se clona el ADN que se desea
secuencia

Se desnaturaliza y se emplea una sola
hélice en la secuenciación
cebador o
“primer”
marcado...