Secuenciacion De Proteinas

SECUENCIACIÓN DE PROTEÍNAS

1) Problema resuelto en clase
Se ha sometido a un péptido a diferentes tratamientos por hidrólisis controlada. Los fragmentos resultantes se han secuenciado por el métodode Edman (tratamiento con isotiocianato de fenilo) obteniéndose los siguientes resultados:
a) Péptidos obtenidos por hidrólisis con tripsina:
Ala-Ala-Trp-gly-lys
Thr-Asn-Val-Lys
b) Péptidos obtenidospor hidrólisis con quimotripsina:
Thr-Asn-Val-Lys-Ala-Ala-Trp
Gly-Lys
Determinar el péptido de partida

2) Problema propuesto
Se ha sometido a un péptido a diferentes tratamientos por hidrólisiscontrolada. Los fragmentos resultantes se han secuenciado por el método de Edman (tratamiento con isotiocianato de fenilo) obteniéndose los siguientes resultados:
a) Péptidos obtenidos por hidrólisis contripsina:
Ser-Trp-gly-Ile
Ala-Tyr-Met-Lys
Ala-Lys
b) Péptidos obtenidos por hidrólisis con quimotripsina:
Met-Lys-Ser-Trp
Ala-Lys-Ala-Tyr
Gly-Ile
Determinar el péptido de partida

Diferentesposibilidades en el orden de aa con tripsina:
Al haber más de dos cortes, la posibilidad de combinación es mayor:
1. Ser-Trp-gly-Ile- Ala-Tyr-Met-Lys- Ala-Lys
2. Ala-Tyr-Met-Lys- Ala-Lys- Ser-Trp-gly-Ile
3.Ala-Lys- Ser-Trp-gly-Ile- Ala-Tyr-Met-Lys
…
Pero la única posibilidad correcta es la siguiente:
Ala-Lys-Ala-Tyr-Met-Lys-Ser-Trp-Gly-Ile
Es fácil deducirlo si sabemos por cual aminoácido corta cada unade las peptidasas.

3) Problema propuesto
Se ha aislado un péptido cerebral que actúa como inhibidor del dolor (opiáceo). Determinar la secuencia de aminoácidos del péptido utilizando la informaciónque se da a continuación:
a) La hidrólisis completa del péptido en medio ácido indica la presencia de Gly, Leu, Phe y Tyr en una proporción 2:1:1:1.
b) El tratamiento del péptido fluordinitrobenceno nosindica que el aminoácido amino terminal es Tyr.
c) Al tratar el péptido con quimotripsina da lugar a tyr y leu libres más un tripéptido que contiene Phe y Gly en una proporción 1:2.

Está claro que...