SELECCIÓN DE UN VECTOR PLASMÍDICO



Nombre: Michelle Caicedo
Fecha: 20 – 05 – 2015

Biotecnología de Microorganismos

SELECCIÓN DE UN VECTOR

Tema del proyecto: Producción de insulina a partir de proteínas recombinantes provenientesde E. Coli para tratar los efectos nocivos de la diabetes Mellitus tipo 1

1) Seleccionar un vector que se ajuste a la célula hospedadora de su proyecto así como a la aplicación del mismo.

El vectorseleccionado es pBluescript II XR Predigested Vector (pBluescript II SK (+)) de la casa © Agilent Technologies, Inc., para producir insulina a partir de proteínas recombinantes en E.coli.

2)Dibujar, o recortar y pegar el mismo del manual de usuario. Una vez hecho esto se procederá a indicar cada una de sus partes, explicando en la misma la función y aplicación con base a lo leído en el manual.Gen de resistencia a la ampicilina: Este gen permite que el vector sea resistente a la ampicilina por lo tanto el crecimiento de las células transformadas se puede identificar sobre un medio quecontenga este antibiótico.

Región intergénica f1: origen de replicación de ss- ADN: pBluescript II contienen una región de 454 pb del fago filamentoso f1 intergénica que incluye el origen dereplicación de 307-bp. La orientación (+) de la región intergénica f1 permite el rescate del ss-ADN (ADN monocatenario) en sentido del lacZ mediante un fago auxiliar.
Gen lacZ: Permite la identificaciónsencilla de los plásmidos recombinantes, ya que en presencia de X-gal permite identificar colonias azules (vector sin inserto), pero si se inserta un fragmento de ADN en el polylinker, se inactiva estegen, y da lugar a colonias de color blanco.

Enzimas de restricción Kpn I y Sac I: reconocen las secuencias específicas de ADN y promueven sitios de corte.

Sitio de clonación múltiple (MSC): contienesitios únicos de reconocimiento de enzimas de restricción organizados con la alternancia de 5 'y 3'-exonucleasa específicos para permitir deleciones seriales.

Promotor lac: la expresión en el vector...