Selección Detección De Clonas

SELECCIÓN Y DETECCIÓN DE CLONES RECOMBINANTES
El término DNA recombinante hace referencia a la creación de nuevas combinaciones de segmentos o de moléculas de DNA que no se encuentranjuntas de manera natural. Aunque el proceso genético de la recombinación produce DNA recombinante, este término se reserva a las moléculas de DNA producidas por la unión de segmentos que provienen dediferentes fuentes biológicas.
La tecnología del DNA recombinante utiliza técnicas que provienen de la bioquímica de los ácidos nucleicos unidas a metodologías genéricas desarrolladas originalmentepara la investigación de bacterias y de virus. La utilización del DNA recombinante es una herramienta poderosa para el aislamiento de poblaciones puras de secuencias específicas de DNA a partir de unapoblación de secuencias mezcladas. Los procedimientos básicos incluyen una serie de pasos:
1. Los fragmentos de DNA se generan utilizando unas enzimas denominadas endonucleasas de restricción, quereconocen y cortan las moléculas de DNA por secuencias nucleotídicas específicas.
2. Los fragmentos producidos mediante la digestión con enzimas de restricción se unen a otras moléculas de DNA quesirven de vectores. Los vectores pueden replicarse autónomamente en una célula huésped y facilitan la manipulación de la molécula de DNA recombinante recién creada.
3. La molécula de DNA recombinante,formada por un vector que lleva un segmento de DNA insertado, se transfiere a una célula huésped. Dentro de esta célula, la molécula de DNA recombinante se replica, produciendo docenas de copiasidénticas conocidas como “clones”.
4. Al replicarse las células huésped, las células descendientes heredan el DNA recombinante, creándose una población de células idénticas, que llevan todas la secuenciaclonada.
5.-Los segmentos de DNA clonados pueden recuperarse de las células huésped, purificarse y analizarse.
6.-Potencialmente, el DNA clonado puede transcribirse, su mRNA puede traducirse, y...