Seleccion De Microorganismos

Selección de microorganismos productores
En estudios previos realizados en el Centro de Biotecnología entre los microorganismos
aislados de muestras provenientes de la Laguna Blanca, Potosí-Bolivia, se identificaron
microorganismos productores de celulasas, donde 9 cepas fueron las que presentaron los
valores más altos en la producción de este tipo de enzima hidrolítica.
3.3 Caracterizaciónmacro y microscópica de las cepas en estudio
3.3.1. Caracterización morfológica celular de cada cepa
Se realizó la caracterización morfológica por medio del desarrollo de colonias jóvenes de 24
horas de crecimiento en medio HM con agar. Transcurridas las 24 horas, se procedió a
observar sus características a través de un estereoscopio. Se caracterizó las 9 cepas
morfológicamente teniendo encuenta su: forma, elevación, borde, superficie, color y
consistencia.
3.3.2 Caracterización de la pared celular
Tinción de Gram
Es una tinción diferencial que sirve para diferenciar entre las bacterias que pueden retener el
colorante cristal violeta, presentando un negro-azulado intenso luego de la de la decoloración
(gran positivos), y aquellas que no pueden y se tiñen de rosado-rojo (grannegativos) (Anexo
1.1).
3.3.3 Caracterización bioquímica
Los agentes utilizados en esta caracterización y los principios teóricos relacionados con la
actividad celular se describen a continuacion.
Prueba de Catalasa H2O2 al 3%.
Se realizó la prueba de la catalasa en las cepas, esta prueba busca la presencia de la
enzima catalasa, la cual descompone el peróxido de hidrogeno H2O2 (Anexo 1.2).La
presencia de catalasa en una cepa le sirve a esta para protegerse de agentes oxidantes en
su medio.
Prueba de formación de esporas
La formación de esporas es propiedad de algunos microorganismos. La espora en
bacteriología es una forma de reposo, con función de resistencia. Al hallarse los
microorganismos en un medio determinado, sobre todo de condiciones desfavorables, en
éstos surgenciertos cambios estructurales. El citoplasma de uno de los sectores de la célula
se endurece junto con una parte del nucleoide, formándose la membrana de pre-espora;
luego esta última se cubre con una envoltura sólida multiestratificada poco permeable. El
resto de la célula deja de existir, mientras que de la parte viva la forma la espora madura. En
ese estado, pueden permanecer inactivasdurante largos periodos de tiempo, y, gracias en
parte a la fortaleza de la envoltura de la espora, poseen una notable resistencia a factores
medioambientales extremos, incluyendo calor, radiación y sustancias químicas de alta
toxicidad. Una vez que vuelven a disfrutar de condiciones favorables, las esporas salen del
estado de inactividad mediante la germinación y regresan al modo vegetativo dereproducción (Anexo 1.3).
3.4 Determinación de las condiciones óptimas de concentración de sal y pH para el
crecimiento celular
La presente prueba se realizó para determinar si existen diferencias en el crecimiento
bacteriano a diferente pH y concentración de sal. Para esto, cada cepa bacteriana fue
sembrada en cajas petri que contenían medio de cultivo sólido HM y la correspondienteconcentración de sal (0%, 3%, 5%, 10% y 15% de NaCl) y pH (6, 7, 7.5, 8 y 9).
Las cajas petri se incubaron a una temperatura de 30 ºC por 48 horas. El crecimiento fue
evaluado mediante la observación de crecimiento de la cepa en el medio solido
correspondiente en intervalos de tiempo de 24 y 48 horas desde el momento sembrado.
3.5 Selección de los mejores microorganismos productores de celulasas
Paraseleccionar a los microorganismos que produzcan la mayor cantidad de enzima
hidrolítica se procedió a preparar 20 ml de medio líquido HM modificado (Tabla 6) en tubos
falcons de 50 ml con 2% y 1% de papel filtro picado (celulosa) como fuente de carbono, se
inoculó a cada tubo con la cepa respectiva y se incubó a 30 ºC y 200 rpm durante 72 horas.
Se extrajeron muestras de 1 ml cada 12 horas...