Selección Clones Recombinantes
Introducción
Métodos de selección
Métodos genéticos
-
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Genes que codifican resistencia a antibiótico
Genes que complementan defectosnutricionales o en rutas biosintéticas
Genes que codifican proteína detectable
Genes que permiten la inactivación insercional
Métodos inmunoquímicos
Métodos de hibridación
-
Fase Líquida
Soporte SólidoDiseño y marcaje de “sondas”
Marcaje Directo
Marcaje Indirecto
Bibliografía
Autores
Introducción.
Vector de
clonación
Muestra
DNA
Fragmentos DNA
Vector sin
insertoVectores
con inserto
TRANSFORMACIÓN
No Transformante
Transformante pero
No Recombinante
Transformante
y Recombinante
Selección de organismos recombinantes.
Diversidad de
productosen
proceso de
creación de DNA
recombinante
DETECCIÓN
de células que
han
incorporado en
DNA
recombinante
SELECCIÓN DE
CLONES
RECOMBINANTES
• ¿Qué es? Conseguir que solo las célulasde interés
sobrevivan en el cultivo.
• ¿Qué nos permite? Facilitar la propagación celular y
reducir el número de clones que se deben seguir
cultivando.
- Métodos genéticos.
• Métodos deselección - Métodos de hibridación
- Métodos inmunoquímicos
Métodos genéticos o de selección fenotípica.
Genes marcadores en
el vector de clonación
• Genes de resistencia a un antibiótico: codificanproteínas que
permiten el crecimiento de la célula de interés en presencia de
determinados antibióticos. Por ejemplo el gen ampr codifica una β–
lactamasa capaz de degradar ampicilina.
• Genes quecomplementan defectos nutricionales: disponibilidad de
cepas auxótrofas mutantes en rutas biosintéticas de aa y nt, y de los
genes de levadura que los complementan, como marcadores de selecciónsobre las cepas auxótrofas correspondientes. Las levaduras mutantes no
pueden sobrevivir en un medio de cultivo que carezca del nutriente en
cuestión. Solo las transformadas que portan el gen...
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