SEMANA 2

REACCIONES Ag : Ac
Blgo. Miguel Angel Purizaca
Navarro

Semana 2:
• Reacciones Ag : Ac
• ELISA
• Western blot
• Inmunofluorescencia.

ELISA
Blgo. Miguel Angel Purizaca
Navarro

Antecedentes:
• En 1960 Rosalyn Yalow y Salomon Berson,
desarrollaron el Radio Inmunoassay R.I.A.
(Radioinmunoensayo)
• Detección de Ag o Ac marcados con
radioisotopos 14C, 3H, 32P, 125I,57Co.
• La radioactividad proporciona una señal que
indica si un Ag específico o un Ac esta presente
en la muestra.
• Se buscaron otras alternativas seguras para el
medio ambiente, que no perjudicaran la salud,
de menor costo, sencilla y practica.
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Antecedentes:
• El E.I.A. Enzyme Inmunoassay, enzimo
inmunoensayo
se
desarrolló
independientemente por Stratis y
Pierce.
• Usa la unión de Acs a Agspara
identificar y medir sustancias, por
colorimetría.
• Primera publicación en 1966, Ancho y
Porath.
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Antecedentes:
• El nombre Enzyme-Linked Inmunosorbent
Assay, luego abreviado como ELISA, fue
acuñado por los Investigadores suecos Eva
Engvall y Peter Perlmann, describieron el
procedimiento, publicado en 1971.
• Las aplicaciones mas interesantes se iniciaron
en el campo de la microbiología yparasitología,
por los grupos de Alister Voller y Dennis Bidwell
en Londres y Joost Ruitenberg en el Institute of
Public Health del estado de Dutch.
• Voller y Bidwell introdujeron el uso de
microplacas de 96 pocillos.
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Importancia:
utilizados en el diagnostico

• Son
medico, la
industria de los alimentos y el estudio y control
del medio ambiente,
• En
estudios
serológicos,
hematológicos,endocrinológicos, oncológicos, en los trasplantes,
la medicina forense y la antropología.
• Con propósitos médicos se han aplicado en la
determinación
de
hormonas
y
proteínas
plasmáticas, antígenos tumorales, drogas, Ag y
Ac de m.o. (parásitos, hongos, bacterias, virus).
• Los resultados aportan elementos diagnósticos,
información de una enfermedad para un buen
tratamiento.
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Los Ac son la base delos
• Analito esinmunoensayos:
todo lo que se mide en
una prueba de laboratorio.
• En el inmunoensayo el analito puede
ser un Ag o un Ac
• Los
Acs
poseen
una
alta
especificidad y afinidad para un Ag
especifico. Es esta union especifica la
que permite la deteccion de analitos
por medio de una variedad de
tecnicas de inmunoensayo.
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Los Ac son la base de los
inmunoensayos:
nomenclatura
de losinmunoensayos

• La
es
confusa, en general el nombre tienen la palabra
“inmuno” y posteriormente la palabra que
indica el marcador utilizado (Ej. Enzimo) y por
consiguiente hace referencia a la metodologia
utilizada para la detección de la reacción
colorimétrica, espectrofotometría.
• Con el avance científico-tecnológico se han
desarrollado “in vitro” una gran variedad de Acs
contra las mas diversassustancias biológicas.

Ag + Ac Ag : Ac
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Ventajas I:

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Ventajas II:

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Fundamento:
Se basa e el uso de Ag o Ac marcados con una
enzima, de forma que los conjugados resultantes
tengan
actividad
tanto
inmunológica
como
enzimática. Al estar uno de los componentes (Ag o
Ac) marcado con una enzima e insolubilizado sobre
un soporte (inmunoadsorbente) la Rx Ag : Ac
quedará inmovilizada y, portanto, seráá́ fácilmente
revelada mediante la adición de un substrato
especifico que al actuar la enzima produciráá́ un
color observable a simple vista o cuantificable
mediante el uso de un espectrofotómetro o un
colorímetro.

Los diferentes tipos de ELISA son los que se
enumeran a continuación:

• Anticuerpos marcados:
– ELISA Directo
– ELISA Indirecto
– ELISA sándwich
– Doble (DAS) Heterólogo(HADAS)

• Antígeno marcado:
- ELISA competitivo

ELISA Directo.
• Consta de las siguientes etapas:
– Fijación al soporte insoluble (“tapizado”)
de Ags específicos. Lavado para eliminar
los Ags fijados deficientemente o no
fijados.
– Adición de Acs marcados (“conjugados”)
con una enzima; si los Acs reaccionan con
los Ags, el complejo quedará solubilizado.
Lavado para eliminar los anticuerpos...