Seminario 1 Espa Ol

Llevar una enzima, Volver a la Vida
Por la década de 1950, los científicos se dieron cuenta de que el ADN tenía el código que permitió proteínas a ser sintetizados. Sin embargo, cómo una cadena de amino ácidos se pliega en una proteína totalmente funcional, con el buen tridimensional estructura, seguía siendo un misterio. Un mecanismo debe existir para asegurar el correcto plegamiento de laproteína. Pero donde hizo eso información? En 1957, Christian Anfinsen publicó la primera evidencia de que la información para el plegamiento correcto se celebró dentro de la propia proteína.

Fondo
Las proteínas están compuestas de combinaciones de 20 aminoácidos que luego doblar en estructuras complejas. El ácido amino desplegada cadena se denomina la estructura primaria. Para tener una actividadbiológica, la proteína debe doblar en buen secundaria y terciaria estructuras. Estas estructuras se mantienen unidas por química interacciones entre las cadenas laterales de los aminoácidos, incluyendo enlaces de hidrógeno, interacciones hidrofóbicas, y, a veces, los enlaces covalentes. ¿Cómo se forman estas estructuras superiores ha sido durante mucho tiempo un misterio. ¿Tiene veces la proteínacorrectamente como se sintetiza o requiere la acción de otras proteínas para doblar correctamente? ¿Puede doblar correctamente en su propio espontáneamente? En la década de 1950, Anfinsen era un bioquímico interesado en el correcto plegamiento de las proteínas. Específicamente, él estaba investigando la formación de puentes disulfuro, que son covalente enlaces entre cadenas laterales de cisteína quesirven como una de
las principales anclas que sostienen juntos la estructura de secretada proteínas. Él creía que la propia proteína contenía toda la información necesaria para el plegamiento de proteínas adecuada. El propuso la "hipótesis termodinámica", que declaró que la estructura biológicamente activa de una proteína fue también el más termodinámicamente estable en condiciones in vivo. Enotras palabras, si las condiciones intracelulares podrían ser imitados en un tubo de ensayo, a continuación, una proteína natural podría doblar en su conformación activa. Comenzó su trabajo en un secretada enzima, ribonucleasa pancreática bovina, y estudiado su capacidad para plegar correctamente fuera de la célula.

El experimento

Las proteínas realizan una amplia variedad de funciones en lacélula. Independientemente de su función, una proteína debe estar correctamente plegada para llevar a cabo su función biológica. Para los estudios de plegamiento de proteínas lo mejor es estudiar una enzima cuya actividad biológica puede monitorizar fácilmente mediante la realización in vitro. Anfinsen elegir una pequeña, proteína secretada, la enzima ribonucleasa, en el cual él podría controlarplegamiento apropiado ensayando su capacidad para catalizar la escisión de RNA. Ribonucleasa, una proteína secretada, es activo bajo oxidante condiciones in vitro. La estructura terciaria de la ribonucleasa activa se mantienen unidos por cuatro puentes disulfuro. Adición un agente reductor, que reduce el enlace disulfuro entre dos cadenas laterales de cisteína a dos grupos sulfhidrilo libres, puedainterrumpir esta interacción covalente. Desnaturalización completa de ribonucleasa requiere tratamiento con un agente reductor. Anfinsen seguimiento de la reducción de la ribonucleasa midiendo el número de grupos sulfhidrilo libres presentes en la proteína. En el estado oxidado, no hay sulfhidrilo libre grupos en ribonucleasa porque cada residuo de cisteína está involucrada en un enlace disulfuro. Enel estado completamente reducida, Por otro lado, la ribonucleasa contiene ocho libre grupos sulfhidrilo. Anfinsen explotado esta diferencia para evaluar el grado de reducción mediante el uso de ensayo espectrofotométrico para titular el número de grupos sulfhidrilo. Para estudiar el plegamiento de proteínas fuera de la célula, uno debe primero desnaturalizar la proteína. Las proteínas se...