Separación de aminoácidos de jugos de frutos por cromatografía bidimensional en capa fina”.






Introducción.

Una mezcla compleja no se separa por completo en un solo cromatograma en papel, sin embargo, puede hacerse mediante cromatografía bidimensional. En esta técnica, se realiza el cromatograma de manera similar, salvo que se utilizan dos fases móviles y la aplicación de la muestra se realiza en una esquina de la hoja de papel, el cromatograma se gira 90° para comenzar acorrer el primer disolvente y nuevamente se gira 90° para el corrimiento del segundo (Figura I).


Figura I. Cromatografía bidimensional en capa fina.

Dado que cada compuesto migra a una velocidad característica en un sistema de solventes (fundamento cualquier método cromatográfico), la segunda cromatografía debería incrementar en grado sustancial la separación de la muestra compleja.Objetivos.
1. Separar los aminoácidos presentes en jugo de mandarina por cromatografía bidimensional en capa fina.
2. Identificar los aminoácidos separados por comparación de sus valores de Rf con los de soluciones tipo de aminoácidos
3. Comprar el grado de resolución de la cromatografía bidimensional, con el de la unidimensional.

Resultados.


Se trabajó con zumo de mandarina de la especieCitrus reticulata, el cuel, contiene los aminoácidos de la tabla I.


Tabla I. Aminoácidos contenidos en el zumo de mandarina de la especie Citrus reticulata.
Nutriente
Cantidad (mg)
Nutriente
Cantidad (mg)
Ácido aspártico
77
Leucina
16
Ácido glutámico
64
Lisina
32
Alanina
34
Metionina
13
Arginina
44
Prolina
31
Cistina
7
Serina
22
Fenilalanina
21
Tirosina
11Glicina
64
Treonina
10
Histidina
12
Triptofano
6
Isoleucina
17
Valina
27





Figura I. Cromatofolio eluido con cloroformo-metanol-amoníaco (Primera fase móvil).
Figura II. Cromatofolio eluido con butanol-ácido acético-agua (segunda fase móvil)





Figura III. Cromatofolio con aminoácidos tipo eluido con ambas fases.
Figura III. Cromatofolio con el problema (jugó demandarina) eluido con ambas fases.

Tabla II. Cromatogramas unidimensionales tipo desarrollados en las 2 fases móviles.
Aminoácido
Primera fase móvil
Segunda fase móvil

Frente del soluto
Frente del disolvente
Rf
Frente del soluto
Frente del disolvente
Rf
Arg
1.1
8.2
0.1341
1.1
7.0
0.1574
Lys
1.7
8.2
0.2073
0.8
7.0
0.1143
Glu
3.2
8.2
0.3902
2.2
7.0
0.3143
Gly3.3
8.2
0.4024
2.0
7.0
0.2857
Pro
3.7
8.2
0.4512
1.9
7.0
0.2714
Thr
3.9
8.2
0.4756
2.3
7.0
0.3286
His
4.0
8.2
0.4878
0.9
7.0
0.1286
Tyr
4.1
8.2
0.5000
3.8
7.0
0.5429
Met
5.3
8.2
0.6463
3.7
7.0
0.5886
Phe
5.6
8.2
0.6829
4.2
7.0
0.6000








Tabla III. Cromatograma bidimensional tipo desarrollados en las 2 fases móviles.
Número de manchaPrimera fase móvil
Segunda fase móvil
Aminoácido identificado

Frente del soluto
Frente del disolvente
Rf
Frente del soluto
Frente del disolvente
Rf

1
1.2
8.5
0.1412
1.2
6.8
0.1765
Arg
2
1.6
8.5
0.1882
0.9
6.8
0.1325
Lys
3
2.4
8.5
0.2823
2.4
6.8
0.3529
Thr
4
2.9
8.5
0.3412
1.9
6.8
0.2794
Pro
5
3.2
8.5
0.3765
2.3
6.8
0.3382
Glu
6
3.3
8.50.3882
1.3
6.8
0.1912
Gly
7
3.4
8.5
0.4000
0.7
6.8
0.1029
His
8
3.6
8.5
0.4235
4.0
6.8
0.5882
Tyr
9
4.6
8.5
0.5412
3.8
6.8
0.5588
Met
10
5.0
8.5
0.5882
4.5
6.8
0.6618
Phe

Tabla IV. Cromatograma bidimensional problema desarrollados en las 2 fases móviles.
Número de mancha
Primera fase móvil
Segunda fase móvil
Aminoácido identificado

Frente del solutoFrente del disolvente
Rf
Frente del soluto
Frente del disolvente
Rf

1
0.5
8.5
0.0588
0.4
8.6
0.0465
-
2
1.2
8.5
0.1412
0.7
8.6
0.0814
Arg
3
1.9
8.5
0.2235
1.3
8.5
0.1529
-
4
2.5
8.5
0.2941
1.8
8.3
0.2169
-
5
3.3
8.5
0.3882
1.8
8.0
0.2250
Glu
6
4.1
8.5
0.4823
2.3
7.8
0.2949
His
7
5.1
8.5
0.6000
3.6
7.6
0.4737
Tyr
8
5.6
8.5
0.6588...