Separación por HPLC de compuestos aromáticos.


Nombre de la práctica:
Separación por HPLC de compuestos aromáticos.


Práctica
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1-17
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Fecha:27/02/2014
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Contenido
Página
I. INTRODUCCIÓN
2
II. CONOCIMIENTOS PREVIOS
4
III. OBJETIVO
5
IV. METODOLOGIA
IV. 1. Material y equipo.
IV. 2. Reactivos y soluciones.IV. 3. Requerimientos de seguridad
IV.4. Disposición de residuos
IV. 5. Procedimiento.
IV. 6. Diseño experimental (si lo hay)
5
V. RESULTADOS.
V.1 Cálculos
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VI. DISCUSION.
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VII. CONCLUSIONES.
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VIII. BIBLIOGRAFIA
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I. INTRODUCCIÓN
En una primera etapa, la cromatografía de líquidos se llevaba a cabo en columnas de vidrio con diámetrosde 1 a 5 cm y longitudes de 50 a 500 cm. Para asegurar unos caudales razonables, el diámetro de las partículas de la fase estacionaria sólida por lo general era de 150 a 200 µm. Incluso así, los caudales eran bajos, llegando a unas pocas décimas de mililitro por minuto. En consecuencia, los tiempos de separación eran largos, a menudo de varias horas. Sin embargo, los intentos para acelerar elprocedimiento clásico mediante la aplicación de vacío o por bombeo no resultaron efectivos, puesto a que el caudal originaba un aumento de la altura de plato frente al caudal y el resultado era una menor eficacia.

En las primeras etapas del desarrollo de la cromatografía de líquidos, los científicos se dieron cuenta que se podría conseguir grandes aumentos en la eficacia de la columnadisminuyendo el tamaño de las partículas de los rellenos. Sin embargo, no fue hasta finales de los años setenta cuando se desarrolló la tecnología adecuada para producir y utilizar rellenos de tamaño de la partícula tan pequeños como los del orden de 3 a 10 µm. Esta tecnología requiere una instrumentación sofisticada para poder trabajar a altas presiones, lo que contrasta notablemente con las simplescolumnas de vidrio de la cromatografía de líquidos clásica cuyo caudal se debe a la gravedad. Para distinguir estos procedimientos más nuevos de los métodos básicos, que todavía se utilizan con fines preparativos, se emplea la denominación de cromatografía de líquidos de alta eficacia (HPLC).

La cromatografía de líquidos de alta eficacia es la técnica analítica de separación más ampliamenteutilizada, con unas ventas anuales de equipos de HPLC que se aproximan a la cifra de mil millones de dólares. Las razones de la popularidad de esta técnica son su sensibilidad, su fácil adaptación a las determinaciones cuantitativas exactas, su idoneidad para la separación de especies no volátiles o termolábiles y, sobre todo, su gran aplicabilidad a sus tendencias que son de primordial interés en laindustria, en muchos campos de la ciencia y para la sociedad en general. Algunos ejemplos de estos materiales incluyen: aminoácidos, proteínas, ácidos nucleicos, hidrocarburos, carbohidratos, fármacos, terpenoides, plaguicidas, antibióticos, esteroides, especies organometálicas y una variedad de sustancias inorgánicas.

La cromatografía líquida de alta eficacia se encuadra dentro de lacromatografía de elución. En ésta, un líquido (fase móvil) circula en íntimo contacto con un sólido u otro liquido inmiscible (fase estacionaria); al introducir una mezcla de substancias (analitos) en la corriente de fase móvil, cada analito avanzará a lo largo del sistema con una velocidad diferente que dependerá de su afinidad por cada una de las fases. Esto supone que después de terminado el recorridode la muestra por la columna, cada una de las substancias en el sistema eluirá con un tiempo diferente, es decir, estarán separadas.


Los componentes básicos de un cromatógrafo de líquidos son:
-Dispositivo de suministro de eluyentes (bomba y dispositivo de mezclado de eluyentes).
-Dispositivo de inyección
-Conducciones y conexiones
-Columna
-Detector y registrador.



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