Separación E Identificación De Aminoácidos De Jugo De Frutos Por Cromatografía Bidimensional En Capa Fina

SEPARACIÓN E IDENTIFICACIÓN DE AMINOÁCIDOS DE JUGO DE FRUTOS POR CROMATOGRAFÍA BIDIMENSIONAL EN CAPA FINA

Objetivos
*Separar aminoácidos presentes en jugo de frutos, mediante la cromatografía bidimensional en capa fina
*Obtener los Rf de las muestras y con ayuda de estas, identificar aminoácidos separados de la muestra problema
*Comparar los 2 tipos de cromatografía plana; unidimensional ybidimensional

Introducción
Los métodos de cromatografía plana incluyen la cromatografía en capa fina (TLC) y la cromatografía en papel (PC). En todos los casos se emplea una capa plana y relativamente delgada de un material que a su vez es el soporte, o bien que recubre una superficie de vidrio, plástico o metálica. La fase móvil se mueve a través de la estacionaria por capilaridad, aveces ayudada por gravedad o por aplicación de un potencial eléctrico.
El desarrollo de la placa es un proceso análogo a la elución en la cromatografía de líquidos. La forma más común de desarrollar la placa consiste en depositar una gota de la muestra cerca de unos de los extremos de la placa, y marcar su posición con un lápiz. Tras la evaporación del disolvente en el que estaba disuelta la muestra,se coloca la placa en un recipiente cerrado. Uno de los extremos de la placa se introduce en el eluyente procurando evitar el contacto directo de este con la muestra. El eluyente asciende por la placa gracias el efecto de capilaridad ejercido entre las finas partículas. A medida que el eluyente se desplaza pasa por el punto de aplicación de la muestra, la disuelve y la arrastra por la placadistribuyéndose entre el disolvente que se desplaza y la fase estacionaria (silica). Después que el disolvente ha pasado a través de la mitad o las dos terceras partes de la longitud de la placa, se retira esta del recipiente y se seca. Las posiciones dela muestra se pueden determinar por distintos procedimientos. Dos de ellos se usan con la mayoría de las mezclas de sustancias orgánicas. Consisten ennebulizar sobre la placa una disolución de yodo o de ácido sulfúrico, ya que ambos reaccionan con los compuestos orgánicos para dar productos oscuros.
Cromatografía en plano bidimensional: La muestra se coloca en una de las esquinas de una placa cuadrada y se realiza el desarrollo en dirección ascendente con el disolvente A (fase móvil 1). A continuación se elimina este disolvente porevaporación, y se gira la placa 90 grados, realizando ahora el desarrollo ascendente con el disolvente B (fase móvil 2). Tras la eliminación del disolvente, se determina la posición de los componentes con un reactivo de revelado, tipo ninhidrina, y las manchas originadas se identifican comparando sus posiciones con las de los estándares.



Resultados

Aminoácido 1° FASE MÓVIL 2° FASE MÓVIL
Frentedel soluto Frente del disolvente Rf Frente del soluto Frente de disolvente Rf
Arg 0.9 8.3 0.11 0 8.2 0
Lys 0.9 8.3 0.11 0 8.2 0
Pro 3.1 8.3 0.37 2.3 8.2 0.28
Gly 3.25 8.3 0.39 1.4 8.2 0.17
Glu 3.4 8.3 0.41 4.7 8.2 0.57
His 4 8.3 0.48 0.5 8.2 0.06
Thr 4.4 8.3 0.53 2.8 8.2 0.34
tyr 5.2 8.3 0.63 4.2 8.2 0.51
Met 5.8 8.3 0.7 4 8.2 0.49
Phe 6.3 8.3 0.76 4.4 8.2 0.54




No de mancha Frentedel soluto Frente del disolvente Rf Aminoácido Correspondiente
1 0.2 8.3 0.02 NI
2 0.85 8.3 0.1 Lys o Pro
3 2.75 8.3 0.33 NI



No de mancha Frente del soluto Frente del disolvente Rf Aminoácido Correspondiente
1 0.5 8.2 0.06 Lys o Pro
2 1.2 8.2 0.15 NI
3 1.7 8.2 0.21 NI
4 2.2 8.2 0.27 NI
5 7 8.2 0.85 NI




No de mancha 1° Fase móvil 2° Fase móvil Aminoácido correspondienteFrente del soluto Frente del disolvente Rf Frente del soluto Frente del disolvente Rf
1 0.8 8.1 0.1 0 8.1 0 Lys
2 0.8 8.1 0.1 0 8.1 0 Arg
3 2.6 8.1 0.32 1.4 8.1 0.17 Pro
4 2.65 8.1 0.33 5.2 8.1 0.64 Gly
5 2.7 8.1 0.33 2.1 8.1 0.26 Glu
6 3.4 8.1 0.42 0.3 8.1 0.04 His
7 4 8.1 0.49 1.9 8.1 0.23 Thr
8 4.7 8.1 0.58 4.3 8.1 0.53 Tyr
9 5 8.1 0.62 3.7 8.1 0.46 Met
10 5.7 8.1 0.7 4.6 8.1 0.57...