Separacio De Nuclis

PRÀCTICA 1: SEPARACIÓ DELS NUCLIS DE LES CÈL·LULES

Observar i identificar el nucli en cèl·lules origen animal.
FONAMENT:
El nucli sol ser l'orgànul més predominant de la cèl·lula. Es troba envoltat per un embolcall nuclear i es troba sol en cèl·lules eucariotes, i és la localització de la majoria dels diferents tipus d'àcids nucleics. Per comú és esfèric o oval i té un diàmetre mitjà de 5μm.A causa de la seva grandària i al fet que ocupa una posició relativament fixa al centre de les cèl·lules se li va denominar el centre de regulació de la cèl·lula. En el seu interior trobem tota la informació genètica de la cèl·lula en forma d'àcid desoxiribonucleic (ADN), que presenta diverses organitzacions al llarg de la vida cel·lular.
Per aquesta pràctica utilitzarem una substància tampó oamortidor que serveix com a regulador del pH quan hi afegim l'aigua, tornant-se aquest constant. D'aquesta manera, si s'agreguen un àcid o una base, no tindran cap efecte sobre l'aigua, ja que aquesta sempre s'estabilitzarà immediatament.

GENERALITATS:
El nucli està envoltat per un parell de membranes concèntriques, que separen el contingut nuclear respecte del citoplasma circumdant. Aquestesdues membranes guarden entre si una distància de 30 a 40 nm i es fusionen a intervals, en els anomenats porus nuclears, que regulen el pas de determinats materials cap al citoplasma des de l'interior del nucli, o la inversa. Dins de la membrana nuclear es troba un mitjà semifluid en el qual estan suspesos els cromosomes. En general es troben en forma d'estructures molt allargades i no poden serobservats fàcilment amb el microscopi òptic. S'utilitza el terme cromatina per referir-se als cromosomes quan es troben sota aquesta condició.
Quan la cèl·lula va a dividir-se en dues cèl·lules, es modifica l'aparença dels cromosomes. Els fils llargs i prims s'enrotllen en forma de cossos espessos, densos, els quals es poden veure al microscopi òptic amb l'ajuda d'un colorant apropiat. Durant elprocés de la divisió cel·lular, els cromosomes es distribueixen en números exactament iguals entre ambdues cèl·lules filles.
Químicament, els cromosomes estan compostos d'ADN i proteïnes, anomenades histones que són les principals associades als cromosomes. Les histones són proteïnes bàsiques, pel fet que són riques en aminoàcids com ara lisina i arginina. Cada un d'aquests aminoàcids conté un grupamino lliure, capaç d'adquirir un protó per posseir un parell d'electrons no compartit. Per tant, les histones tenen càrrega positiva. L'ADN porta càrrega negativa a causa de la presència de nombrosos grups fosfat. Per tant, no és sorprenent que les histones s'enllacen fortament amb l'ADN. Quan es prepara la cromatina de certa manera, el microscopi electrònic revela la presència de fils llargs quecontenen engruiximents regularment espaiats que donen l'aparença de nusos sobre una corda. Els engruiximents reben el nom de nucleosomes. El fil que las uneix és ADN. Cada nucleosoma conté ADN i quatre dels cinc tipus d'histones. Associades amb l'ADN de la cromatina es troben també altres proteïnes, encara que en quantitats menors que les histones. Aquestes altres proteïnes s'esmenten de vegadescom les proteïnes àcides, però potser el terme no històniques és el més exacte. Durant el període comprès entre les divisions cel·lulars, quan els cromosomes es troben estesos, un o més d'ells poden estar adherits a un cos esfèric de bona grandària. Aquest cos rep el nom de nuclèol i és fàcilment visible amb el microscopi òptic. En el nuclèol es sintetitzen diversos tipus de molècules d'ARN. Partd'aquest ARN s'utilitza en la configuració dels ribosomes. Els ribosomes són essencials per a la síntesi de proteïnes en les cèl·lules.

MATERIAL:

Microscopi.
Portaobjectes.
Cobreobjectes.
Llancetes
Vas de precipitats.
Pipetes graduades.
Pipeta pasteur.
Tubs d'assaig
Tubs de centrífuga
Centrífuga.
Liquadora.

MATERIAL BIOLÒGIC
Fetge de pollastre fresc.

REACTIUS:
Tampó de...