Separacion De Compuestos Organicos Por Cromatografia

SEPARACIÓN DE COMPUESTOS ORGÁNICOS POR CROMATOGRAFÍA



I. OBJETIVOS
-Conocer conceptos cromatográficos
-Determinación de los componentes orgánicos presentes en una muestra






II. FUNDAMENTO



Cromatografía

La palabra Cromatografía significa "Escribir en Colores" ya que cuando fue desarrollada los componentes separados eran colorantes. Loscomponentes de una mezcla pueden presentar una diferente tendencia a permanecer en cualquiera de las fases involucradas. Mientras más veces los componentes viajen de una fase a la otra (partición) se obtendrá una mejor separación.
La cromatografía es un conjunto de técnicas basadas en el principio de retención selectiva cuyo objetivo es separar los distintos componentes de una mezcla y en algunos casosidentificar estos si es que no se conoce su composición.
Las técnicas cromatográficas son muy variadas, pero en todas ellas hay una fase móvil que consiste en un fluido (gas, líquido o fluido supercrítico) que arrastra a la muestra a través de una fase estacionaria que se trata de un sólido o un líquido fijado en un sólido.
Los componentes de la mezcla interaccionan en distinta forma con lafase estacionaria y con la fase móvil. De este modo, los componentes atraviesan la fase estacionaria a distintas velocidades y se van separando. Después de haber pasado los componentes por la fase estacionaria y haberse separado pasan por un detector que genera una señal que puede depender de la concentración y del tipo de compuesto.

Clasificación

Las distintas técnicas cromatográficas sepueden dividir según cómo esté dispuesta la fase estacionaria:
• Cromatografía plana. La fase estacionaria se sitúa sobre una placa plana o sobre un papel. Las principales técnicas son:


o Cromatografía en capa fina .- En este caso se utiliza una placa de vidrio recubierta con fase estacionaria (generalmente del tipo descrito en la Cromatografía en Columna con algunas variantes)manteniendo un pequeño espesor constante a lo largo de la placa. Esta se coloca en una cuba cromatográfica la cual debe encontrarse saturada con el eluente (Fase Móvil líquida). El eluente ascenderá por la placa y arrastrará los componentes a lo largo de ésta produciendo "manchas" de los componentes. Si los componentes no son coloreados se requerirán técnicas de revelado (Adición de Ninhidrina aaminas, Acido sulfúrico para carbonizar compuestos orgánicos, etc.) o visores ultravioleta.


o Cromatografía en papel El proceso es básicamente el mismo, solo que se usan tiras de papel cromatográfico en la cuba cromatográfica.


• Cromatografía en columna. La fase estacionaria se sitúa dentro de una columna. Según el fluido empleado como fase móvil se distinguen:


oCromatografía de líquidos
o Cromatografía de fluidos supercríticos
Dentro de la cromatografía líquida destaca la cromatografía líquida de alta resolución (HPLC, del inglés High Perfomance Liquid Chromatography), que es la técnica cromatográfica más empleada en la actualidad.
Es parecida a la Cromatografía en Columna, sólo que se aplica el flujo a presión (entre 1500 a 2200psi), el tamaño de partícula es entre 3 y 10 micras, la longitud de la columna es entre 5 y 25 cm y requiere de equipo sofisticado.


Fase Normal
La Fase Móvil es No-Polar (Hexano, Tetracloruro de Carbono, Benceno, etc) y la Fase Estacionaria es Polar (Generalmente Sílica).


Fase Inversa
La Fase Móvil es Polar (Agua, Soluciones "Amortiguadoras de pH",Acetonitrilo, Metanol, etc.) y la Fase Estacionaria es No-Polar (Generalmente Sílica injertada con cadenas de grupos orgánicos de 8 y 18 átomos de Carbón (C8 y C18).


Intercambio Iónico

La Fase Estacionaria es una resina de Intercambio Iónico y tiene la propiedad de separar especies ionizadas (Cationes o Aniones). La Fase Móvil es generalmente una Solución Amortiguadora de pH....