Separacion De Unamexcla Se Azul y Metileno Usando Cromatografia Por Adsorcion

Separación de una mezcla de azul de metileno y fluoresceína usando cromatografía por adsorción
Ávila López Pedro Antonio, 5QV1 sección 1.
Laboratorio de métodos de análisis, departamento de bioquímica, Escuela Nacional De Ciencias Biológicas, IPN.

Resumen
La cromatografía es un conjunto de métodos variados de separación de mezclas. Según la definición dada por Keulemans la cromatografíaes un método de separación en el que los componentes a desglosar se distribuyen entre dos fases, una de las cuales constituye un lecho estacionario de amplio desarrollo superficial y la otra es un fluido que pasa a través o a lo largo del lecho estacionario. La cromatografía se introduce en los métodos de separación en 1903 y su posterior desarrolló y evolución se produce hacia 1930. La primerapersona que definió la cromatografía fue el botánico ruso Miguel Tswett (1872-1913) en 1906 y eligió el término cromatografía procedente de las palabras griegas khromatos (color) y graphos (escrito) ya que utilizó el término cromatografía para describir la separación de pigmentos vegetales en distintas zonas coloreadas.
Los objetivos de la práctica son pretender aplicar la técnica decromatografía por adsorción para la separación de dos colorantes. Se comprobara la separación con base en el perfil de elución.
Palabras clave: cromatografía, adsorción, eluato, elución, eluyente, elución isocrática, elución en gradiente, perfil de elución.

Fundamento
El fundamento de la práctica es la separación de los colorantes azul de metileno y fluoresceína basándose en la distribución selectiva deestos a lo largo de la columna por efecto de retención por adsorción en la fase estacionaria y su solubilidad con los eluyentes utilizados.

Introducción
En la cromatografía de adsorción en columna la fase estacionaria está constituida por un sólido que se empaqueta en una columna, normalmente de vidrio. Los componentes a separar se añaden en forma soluble por la parte superior de la columna,quedando retenidos en la misma. Posteriormente los componentes se desplazan arrastrados por una fase móvil líquida. Dependiendo de la absorción selectiva de cada uno de ellos por la fase estacionaria se desplazan a distinta velocidad, efectuándose la separación. Para que haya una separación efectiva de los componentes, su velocidad a través de la columna debe ser suficientemente diferente y lalongitud de la columna, adecuada. La única variable que altera el coeficiente de partición de los analitos es la composición de la fase móvil. Este tipo de cromatografía se usa para separa compuestos orgánicos insolubles y relativamente no polares con pesos moleculares de menor de 5000 D. No ofrece ninguna ventaja especial sobre la cromatografía líquido-líquido a excepción del análisis de isómeros.Se usa para separar esteroides, diversos fármacos, aceites naturales, pigmentos vegetales, vitaminas hidrosolubles, etc.
Para definir la eficacia se utiliza el concepto de plato teórico, y se define éste como la sección teórico-transversal en la cual se realiza el equilibrio de partición durante el flujo de fase móvil. Cuanto mayor se el número de platos teórico mayor será la eficiencia de lacolumna. El número de platos teóricos mide la capacidad de la columna para separar los componentes, no la retención de los mismos. La eficiencia o el número de platos se puede observa directamente a partir del cromatograma, observando la agudeza de los picos.

Material y métodos
Se preparo una columna con agua destilada hasta tres cuartas partes de su capacidad, se introduzco un disco de lana devidrio para posteriormente evitar la salida de la alúmina alcalina, la cual se agrego una cantidad de 10 g.
Procurar que la alúmina no se seco en ningún momento del proceso y que no se formen estratos ni burbujas de aire.
Una vez sedimentada la alúmina se adiciono 0.1 mL de la mezcla de colorantes en la parte central de la columna.
Se colectaron fracciones de 3 mL de eluato adicionando agua...