Separacion Fisica De Macromoleculas

Procedimientos
El volumen intersticial lo indica alguna molécula de alto peso molecular; se utiliza azul dextrano, polisacárido de masa molecular aproximada 2.000 kDa. El volumen de poro es ladiferencia entre el volumen total y el volumen de exclusión: para calcular el volumen total se añade a la muestra una molécula de bajo peso molecular, que puede ser el rojo fenol (354.39u.m.a.). El índicede Kovacks (Kd) obtenido para una determinada proteína se ha de incluir en una recta de regresión calculada con proteínas patrones, de peso molecular conocido, representándose Kd vs. log masamolecular.
Existen multitud de matrices para realizar este tipo de cromatografía. Su elección dependerá de la resolución requerida y del peso molecular de las moléculas a fraccionar. El Sephadex es una delas matrices que primero se han empleado. Se trata de perlas de un polímero polisacárido preparado con diferentes tamaños de poro: G-10, G-25, G-50, G-75, G-100 y G-200. La primera de ellas se empleapara desalar muestras porque el diámetro de sus poros solo permite el paso de moléculas pequeñas (no más de 1.000 kDa); la última permite la separación de moléculas de masa molecular entre 500 y 5 kDa.Este tipo de matriz está disponible en dos formas: gruesa y fina, la primera permite flujos superiores, pero la resolución obtenida es menor. Con todo, la resolución posible con este tipo de matrizes pobre. Para mayor resolución se emplean matrices con mejores propiedades de flujo y resistencia a la presión, ésto se ha conseguido sacando al mercado matrices de diversa composición, y mejorando laestructura de las perlas de dichos geles.Así, Sepharose (polisacárida) es similar Sephacryl (polímero de un polisacárido y bis-acrilamida), y ambas permiten mayor resolución que Sephadex, siendoSuperose y Superdex (polisacáridas) las mejores.
La resolución en cromatografía es crítica. Una columna con gran resolución es una columna que soporta un gran número de platos teóricos por metro. Un...