Separacion, precipitacion y punto isoeletrico de proteinas

Introduccion:

Los multiples grupos acido base de una proteína determinan sus propiedades de solubilidad y dependen de la concentración de las sales disueltas, de la polaridad del disolvente, del ph y de la Temperatura
Ciertas proteínas precipitan de su disolución en condicione en las que otra permanecen completamente solubles.
La solubilidad de una proteína en disolución acuosa en unafunción sensible a las concentraciones de la sales disueltas.
La solubilidad de una proteína a una fuerza ionica determinada varian con el tipo de iones que se encuentran en la solución.
Cuando las fuerzas ionicas son elevadas, la solubilidad disminuye, este efecto es conocido como precipitación por salado.
Los diolventes organicos son generalmente bueno precipitantes de proteínas debido a suspequeñas constantes dieléctricas provocan la disminución del poder de solvatación de sus disoluciones acuosas respecto a los iones disueltos.
La disminución en la constante dieléctrica aumenta también las diferencias en el comportamiento de la precipitación por salado, de modo que se pueden combinar efectivamente las técnicas.
Cada proteína muestra un valor de pH característico en el que las cargaspositivas y negativas e contrarrestan, a este valor de pH se le llama punto isoeléctrico y la proteína no es portadora de carga, por tanto, inmóvil dentro de un campo eléctrico, de aquí que, en disoluciones cuya concentración de sal es moderada, la solubilidad de una proteína es una función del pH y es de esperar que sea minima al punto isoeléctrico de la proteína y que aumenete en torno de este puntocon repecto al pH.

Objetivos:

Observar el efecto producido por algunos agentes fisicoquímicos sobre la solubilidad de la proteínas.
Determinar el punto isoeléctrico de la Insulina.





Resultados:
Separacion de proteínas por precipitación con sales (salting out).

Prueba Biuret Interpretacion
Filtrado 1 Positiva Es positivo debido a que la solución no se saturocompletamente con la sal y aun había proteínas disueltas en la solución
Precipitado 1 Positiva La poca concentración de la sal basto para hacer precipitar algunas proteínas.
Filtrado 2 Negativa El saturar con sal provoco que todas las proteínas precipitaran.
Precipitado 2 Positiva Se encontraron todas nuestras proteínas en el precipitado

Precipitacion por efecto del pH y de disolventes.

Tubo No. 12 3
Clara de huevo filtrada, dil. 1:3 (ml) 3 3 3
HCl 0.1 N (ml) 1 - -
NaOH 0.1 N (ml) - 1 -
Regulador de acetatos - - 1
Observaciones Poca turbidez Sin turbidez Mucha turbidez
Etanol 3 3 3
Observaciones Muy turbio Poca turbidez Mucha turbidez y precipitación.

Determinacion del punto isoeletrico de la insulina.

Tubo No. Acido Acetico 0.2 M (µl) Acetato de Sodio 0.2 M (µl) Insulina(µl) pH Observaciones
1 230 20 60 3.68 Sin turbidez
2 180 70 60 4.33 Poca turbidez
3 50 200 60 5.35 Mucha Turbidez
4 10 240 60 6.13 Poca turbidez
5 0 250 60 7.22 Poca turbidez

Calculo del pH:
El calculo del pH de cada una de nuestras muestras e realiza mediante la siguiente formula (1):
pH=pKa+log ([SC])/([HA])


Y para el calculo de los moles aplicamos la siguiente formula (2):

n=(Volumen (μl)*Molaridad)/1000000

Sustituyendo en la ecuación (2) para el calculo de numero de moles de Acido Acetico para el tubo numero 1

n=((230)(0.2))/100000=0.000046 mol
Se realiza la misma operación para el calculo de los moles de Acetato de Sodio a los 6 tubos.
Se sustituye en la formula (1) el numero de moles de Acetato y Acido para el tubo No. 1, sabiendo que el pKa es igual a4.75:

pH=4.75+log⁡〖0.000004/0.000046〗=3.68

Se realizan los mismos cálculos para los tubos 1-4.

Para el Calculo del pH del tubo Numero 5 la formula a aplicar es:

pH=(pKw+pKa+log⁡〖[SC])/(2)〗

Sustituyendo:

pH=(14+4.75+log⁡[0.00005])/2=7.22


Precipitacion por metales pesados.
Tubo No. 1 2 3 4 5 6
Clara de huevo filtrada dil. 1:3 (ml) 1 1 1 1 1 1
Cloruro Mercurico 5% (ml)...