Separación De Clorofilas Mediante Cromatografía En Papel

Antecedentes de la problemática
El botánico ruso Mijaíl Tswett4 (Mikhail Semenovich Tswett, 1872-1919) empleó por primera vez en 1906 el término "cromatografía" (que proviene del griego χρομα y γραφω que significan respectivamente chroma "color" y graphos "escribir").
Separación de clorofilas mediante cromatografía en papel
A comienzos del año 1903, Mijail Tsvet usó columnas de adsorción delíquidos para separar pigmentos vegetales (por ejemplo, clorofilas). Las disoluciones se hacían pasar a través de una columna de vidrio rellena de carbonato de calcio, que finamente dividido de un material poroso que interacciona de forma diferente con los componentes de la mezcla, de forma que éstos se separaban en distintas bandas coloreadas a lo largo de la columna.
Los primeros equipos decromatografía de gases aparecieron en el mercado a mediados del siglo XX. A su vez, la cromatografía líquida de alta resolución (HPLC) comenzó a desarrollarse en los años 1960, aumentando su importancia en las décadas siguientes, hasta convertirse en la técnica cromatográfica más empleada. Sin embargo esto se irá modificando con el paso de los años.
El parámetro fundamental que caracteriza a lacromatografia de columna, es la altura a la que se ha quedado determinada una especie química. Esta altura se relaciona directamente con el llamado tiempo de retención: cuanto mayor sea la afinidad de absorción entre el soluto y la especie, menor tiempo de retención presentara. Otro parámetro característico es el volumen de retención, la cantidad necesaria de fase móvil para transportar la especie desdela parte superior de la columna hasta el detector. Cuando el transporte se ha realizado, se establece un equilibrio termodinamico entre las concentraciones de las fases móvil y estacionaria, parámetro que se conoce como coeficiente de repartición. Este equilibro depende de forma fundamental de las propiedades físicas y químicas de las fases, como son la concentración de la disolución móvil, laporosidad de la fase estacionaria, los coeficientes de absorción de cada especie, y la temperatura a la que se realice la mezcla.
Una característica importante del sistema es su eficiencia, que se expresa como una cantidad a dimensional, llamada numero efectivo de platos(numero de bandas de absorción) y que refleja el número de veces que el soluto se reparte entre las dos fases durante su paso através de la columna. La calidad del experimento se caracteriza tanto por el numero de platos como por la resolución, que se define como la separación entre los picos de dos bandas de absorción adyacentes.
En un sistema cromatografico el tiempo de reacción de un soluto particular es constante, y por lo tanto puede utilizarse para identificar ese soluto. En caso de no ser conocido el tiempo deretención de una especie dada siempre se puede recurrir para su identificación a técnicas auxiliares, generalmente espectrografía.

CLASIFICACION DE LOS METODOS CROMATOGRAFICOS
Clasificación según el procedimiento de separación
El principio básico de la separación de las sustancias que componen una mezcla se fundamenta en una serie de sucesivos equilibrios entre la fase estacionaria y la fase móvil.El equilibrio dependerá de la partición o diferente adsorción que tengan la fase estacionaria y los componentes de la mezcla.
La diferencia dependerá de las propiedades físicas y químicas de los componentes. El mayor o menor avance en el sistema cromatográfico dependerá de la afinidad del componente y la fase estacionaria. El componente con menor afinidad por la fase estacionaria en presenciade una fase móvil llamada eluyente será eluido en primer lugar, y por tanto se desplazará con mayor velocidad por el sistema cromatográfico.
Tabla de clasificación de métodos cromatográficos
F. estacionaria F. móvil Soporte Cromatografía Siglas
sólido
(adsorción) gas
líquido columna
columna
capa fina sólido-gas
líquida
en papel y/o capa fina G.S.C / G.C
C.L / H.P.L.C
T.L.C...