Separación De Jugo De Frutos Por Cromatografia BidimEnsional En Capa Fina.

PRÁCTICA 1.
SEPARACIÓN DE AMINOÁCIDOS DE JUGOS DE FRUTOS POR CROMATOGRAFÍA BIDIMENSIONAL EN CAPA FINA.

Objetivos
Separar los aminoácidos presentes en el jugo de melón por medio de la técnica de cromatografía bidimensional en capa fina.
Utilizar los valores de rf obtenidos en la cromatoplaca de soluciones tipo de aminoácidos para identificar por medio de comparación, los aas separados.Comentar las diferencias en el grado de resolución de la cromatografía bidimensional al ser comparada con la cromatografía unidimensional.

Introducción

Figura 1. Ejemplo de cromatografía bidimensional en capa fina (gel de sílice) de algunos aas.

La figura 1 ilustra la separación de aminoácidos de una mezcla mediante el desarrollo de dos dimensiones. La muestra se coloca en una de lasesquinas de una cromatoplaca cuadrada y se realiza el desarrollo en dirección ascendente con el solvente A. En seguida se elimina éste por evaporación, se gira la placa 90° y se realiza ahora el desarrollo ascendente con el solvente B.
Tras la eliminación del solvente se determinan las posiciones de los aminoácidos después de rociar la placa con ninhidrina, reactivo que forma con los aminoácidos unproducto de color púrpura. Las manchas originadas se identifican al comparar sus posiciones con las de los patrones.
Al desarrollar un cromatograma en dos direcciones con dos fases móviles diferentes tenemos lo que se conoce con el nombre de cromatograma bidimensional, este cromatograma nos resulta muy útil, ya que generalmente las mezclas problema contienen muchos componentes y es muy raro elcaso en que una sola fase móvil de desarrollo pueda efectuar una separación de todos ellos, de tal forma que, lo que se observa como una mancha en un cromatograma unidimensional, puede contener en realidad uno o más componentes de la mezcla.


Resultados


Cromatoplaca I Cromatoplaca II


Cromatoplaca IIICromatoplaca IV

Tabla 1. Cromatogramas unidimensionales tipo desarrollados en las 2 fases móviles.


Aminoácido 1° Fase Móvil 2° Fase Móvil
Frente de soluto (cm) Frente de disolvente
(cm)
Rf Frente del soluto
(cm) Frente del disolvente
(cm)
Rf
Arginina 1.6 8 0.2 0.7 8.3 0.0843
Lisina 1.8 8 0.225 0.7 8.3 0.0843
Glutamato 3.7 8 0.4625 3.18.3 0.3735
Prolina 3.8 8 0.475 2.9 8.3 0.3494
Glicina 4 8 0.5 1.2 8.3 0.1446
Treonina 4.4 8 0.55 3.2 8.3 0.3855
Histidina 4.5 8 0.5625 0.7 8.3 0.0843
Tirosina 4.9 8 0.6125 3.8 8.3 0.4578
Metionina 5.9 8 0.7375 3.8 8.3 0.4578
Fenilalanina 6.3 8 0.7875 3.9 8.3 0.4699


Tabla 2. Cromatograma bidimensional tipo desarrollado en las 2 fases móviles.


No de Mancha 1° Fase Móvil 2° FaseMóvil

Aminoácido correspondiente
Frente de soluto (cm) Frente de disolvente
(cm)
Rf Frente del soluto
(cm) Frente del disolvente
(cm)
Rf
9 1.7 8.0 0.2125 6.5 8.5 0.7647 Arginina
10 2.4 8.1 0.2963 5.3 8.4 0.6310 X
4 2.7 8.0 0.3375 5.1 8.4 0.6071 X
6 3.1 7.9 0.3924 4.2 8.5 0.4941 Treonina
5 3.1 7.9 0.3924 3.4 8.5 0.4 X
3 3.3 8.0 0.4125 3.1 8.5 0.3647 X
2 3.6 8.0 0.45 2.4 8.4 0.2857Glutamato
8 3.9 8.2 0.475 2.1 8.5 0.2471 Prolina
7 3.9 7.9 0.4937 0.5 8.4 0.0595 Glicina
2 5.3 8.2 0.6463 0.7 8.4 0.0833 Tirosina
X = No identificados


Tabla 3. Cromatograma bidimensional problema desarrollado en las 2 fases móviles.


No de Mancha 1° Fase Móvil 2° Fase Móvil
Frente de soluto (cm) Frente de disolvente
(cm)
Rf Frente del soluto
(cm) Frente del disolvente
(cm)Rf
8 3.2 8.0 0.4 0.9 8.6 0.1047
4 3.3 7.9 0.4125 2.1 8.5 0.2471
1 3.3 7.9 0.4147 5.8 8.0 0.725
7 4.5 8.0 0.5625 1.2 8.4 0.1429
3 4.8 8.0 0.6 3.0 8.4 0.3571
5 4.9 7.9 0.6125 1.9 8.4 0.2262
6 5.2 8.0 0.65 2.1 8.4 0.25
2 5.8 8.1 0.725 4.2 8.4 0.5


Tabla 4. Cromatograma bidimensional problema (IV) desarrollado en las dos fases móviles.
No de mancha Rf 1ª fase móvil Rf 2ª fase móvil...