Separación De Una Mezcla De Azul De Metileno Y Fluoresceína Usando Cormatografía Por Adsorción

Informe de la Práctica:
“SEPARACIÓN DE UNA MEZCLA DE AZUL DE METILENO Y FLUORESCEÍNA USANDO CORMATOGRAFÍA POR ADSORCIÓN”



OBJETIVOS
* Conocer el efecto de la adsorción en una sepración por cromatografía en columna.
* Conocer el efecto de la desorción en una separación por comatografía en columna.
* Determinar si la efectividad de las fases elejidas para dicha separación.DIAGRAMA DE FLUJO

RESULTADOS
Tabla 1. Valores de absorbancia obtenidos para la separacion de fluoresceína y azul de metileno.
Volumen de elución
(mL) | A493 | A668 |
3 | 0 | |
6 | 0.028 | |
9 | 0.208 | |
12 | 0.053 | |
15 | 0 | |
18 | 0 | |
21 | 0 | |
24 | 0 | |
27 | 0 | |
30 | 0 | |
33 | 0 | |
36 | 0 | |
39 | | 0 |
42 | | 0.003 |
45 | | 0.051 |48 | | 0.156 |
51 | | 0.338 |
54 | | 0.475 |
57 | | 0.444 |
60 | | 0.374 |
63 | | 0.324 |
66 | | 0.247 |
69 | | 0.162 |
72 | | 0.097 |
75 | | 0.052 |
78 | | 0.035 |
81 | | 0.021 |
84 | | 0.016 |
87 | | 0.009 |
90 | | 0.008 |

Figura 1. Gráfico que muestra la relación entre el volúmen de elución y la absorbancia para las muestras con agua (A493) y lasmuestras colectadas con etanol (A668).

La fase estacionaria es un sólido en el que los componentes de la muestra son adsorbidos, en este caso se utilizó alúmina alcalina. La fase móvil puede ser un líquido (cromatografía líquido-sólido) o un gas (cromatografía gas-sólido). Se utilizaron dos fases móviles, el agua y el etanol; los componentes se distribuyen entre dos fases a través de lacombinación de los procesos de adsorción y desorción. La cromatografía de capa fina es un ejemplo especial de cromatografía por adsorción en la cual la fase estacionaria es un plano, en la forma de un soporte sólido en un plato inerte. Para la separación por adsorción se utilizó de soporte una columna de vidrio con una salida que nos permitía colectar por goteo.
ADSORCIÓN: El fenómeno de adsorción es elproceso por el cual átomos o moléculas de una sustancia que se encuentra en determinada fase, son retenidas en la superficie de otra sustancia, que se encuentra en otra fase. Como resultado de este proceso, se forma una capa de líquido o gas en la superficie de una sustancia sólida o líquida.

AZUL DE METILENO

FLOURESCEÍNA

La cantidad de material adsorbido depende de las tasas deadsorción y desorción  de la sustancia, y del punto en el cual se alcance el equilibrio entre ambas. Cuanto mayor sea la adsorción y menor se la desorción, hallaremos mayor cantidad de material adsorbido en equilibrio.
Esto por que el primer colorante que se separó fue la fluoresceína y es más afin al agua que el azul de metileno. Por lo tanto el azul de metileno permanece unido a la alúmina.Posteriormente al cambiar por etanol. La afinidad del azul de metileno por el etanol es mayor que la afinidad que tiene esta molécula por el agua y que por la alúmina. Es por eso que se separa de la colúmna de alúmina. En la adsorción física, las moléculas del gas se mantienen unidas a la superficie del sólido por medio de las fuerzas de Van der Walls relativamente débiles. Esto permite que después de queocurra el fenómeno de adsorción, se de lugar a la desorción, que es cuando

Teniendo en cuenta las propiedades de solubilidad, las modificaciones posibles serian: primero hacer pasar un liquido con una polaridad no afín a la fluoresceína como seria el alcohol propílico acido o isopropilico acido o en su defecto cualquier liquido que este protonado, el cual sería mas afín a la alúmina y así elazul de metileno se vería debilitado en su unión a la misma y posteriormente se agregaría un liquido muy polar como el agua, el cual sería mas afín por la fluoresceína.
DISCUSIÓN
El perfil de elución se graficó a partir de los datos de la tabla 1 y el resultado se observa en la figura 1., Dicho perfil se elaboró para comprobar la separación de la mezcla. La elución resulto casi como la...