Separación de una mezcla de azul de metileno y fluoresceína usando cromatografía por adsorción

Separación de una mezcla de azul de metileno y fluoresceína usando cromatografía por adsorción

Introducción:
La cromatografía por adsorción es una de las técnicas más empleadas para la separación de mezclas en sus componentes puros, purificación de un compuesto y comparación de compuestos que se creen idénticos, entre otros usos. El fundamento está en el diferente grado de adsorción de cadacompuesto sobre la superficie del adsorbente de modo que el compuesto a separar se ve atraído a las zonas afines por fuerzas electrostáticas, ésta interacción triple de soluto, disolvente y adsorbente establece las proporciones relativas en que se fijan y migran a través del adsorbente quedando reversiblemente unido a la molécula, hasta que algún factor externo cambie su afinidad.
Existendiferentes modalidades: Cromatografía de columna -Cromatografía de capa fina TLC
-Cromatografía de gases GC -Cromatografía de líquidos LC -Cromatografía de líquidos de alta eficacia: HPLC


|Flouresceína |Azul de Metileno |
|[pic] |[pic] |
|Colorante orgánico|Colorante |
|Hidrosoluble |Moderadamente soluble en alcohol |
|Color verde intenso |Azul profundo en solución |
|absorción 494 nm y de emisión máxima a | |
|521 nm (en agua). ||
| | |

Objetivos:
Utilizar la técnica de cromatografía de adsorción en columna para separar una mezcla de dos colorantes para comparar el perfil de elución y comparar su separación.


Material y Equipos:
Columna cromatográfica, Pipeta 1mL, Pipeta 10 mL,Gradilla metálica, 30 Tubos de ensaye, Lana de vidrio, 2 Vasos de precipitado, Soporte universal, Pinzas de bureta, Pipeta Pasteur, Espectrofotómetro para región visible, Cubetas de espectrofotómetro.


Métodos: Procedimiento:
























Resultados:

|Vol elución mL |A493 |A 668 |
|3 |-0.013 |0.129 |
|6|0.388 |0.148 |
|9 |1.535 |0.04 |
|12 |1.133 |0.045 |
|15 |0.431 |0.171 |
|18 |0.107 |0.01 |
|21 |0.007 |-0.015 |
|24 |-0.005 |0 |
|27 |0.049|0.247 |
|30 |0.006 |0.187 |
|33 |-0.005 |0.091 |
|36 |0.013 |-0.02 |
|39 |-0.035 |-0.016 |
|42 |-0.023 |0.273 |
|45 |-0.014 |0.403 |
|48 |-0.015 |0.383|
|51 |-0.011 |0.215 |
|54 |-0.028 |0.089 |
|57 |-0.039 |0.039 |
|60 |-0.045 |0.016 |
|63 |-0.048 |-0.03 |
|66 |-0.047 |-0.006 |
|69 |-0.046 |-0.017 |
|72|-0.051 |-0.018 |
|75 |-0.052 |-0.028 |
|78 |-0.051 |-0.029 |
|81 |-0.041 |-0.026 |
|84 |-0.049 |-0.025 |







[pic]


Preguntas:
*Elementos del sistema cromatográfico:
-Fase estacionaria: Sílica Alcalina. Puede ser un sólido poroso que...