Separación e identificación de aminoácidos de jugos de frutos por cromatografía bidimensional en capa fina.

SEPARACIÓN E IDENTIFICACIÓN DE AMINOÁCIDOS DE JUGOS DE FRUTOS POR CROMATOGRAFÍA BIDIMENSIONAL EN CAPA FINA.

Objetivos
Separar los aminoácidos presentes en el jugo de melón por cromatografía bidimensional en capa fina e identificar los aminoácidos separados por comparación de sus valores de Rf con los de soluciones tipo de aminoácidos.Comparar el grado de resolución de la cromatografía bidimensional, con el de la unidimensional.
Introducción
La cromatografía en capa fina se basa en la preparación de una capa, uniforme, de un adsorbente mantenido sobre una placa de vidrio u otro soporte.
La fase móvil es líquida y la fase estacionariaconsiste en un sólido. La fase estacionaria será un componente polar y el eluyente será por lo general menos polar que la fase estacionaria, de forma que los componentes que se desplacen con mayor velocidad serán los menos polares.
La fase estacionaria es una placa de sílica gel y la fase móvil es una solución metanol-cloroformo-amoniaco 17% y metanol-etanol-agua-urea.
El frente del soluto depende delgrupo R del a.a., la adsorción y la solubilidad de este.
Datos experimentales
Cromatogramas unidimensionales tipo desarrollados en las 2 fases móviles |
Aminoácido | 1ª fase móvil | 2ª fase móvil |
| Frente del disolvente | Frente del soluto | Rf | Frente del disolvente | Frente del soluto | Rf |
lys | 7.8 | 3.3 | 0.42 | 8 | 0.3 | 0.04 |
glu | 7.8 | 6.6 | 0.85 | 7.8 | 5.3 | 0.68 |thr | 7.8 | 6.7 | 0.86 | 7.8 | 2 | 0.26 |
arg | 7.8 | 2.5 | 0.32 | 7.8 | 0 | 0 |
tyr | 7.8 | 6.9 | 0.88 | 7.8 | 4.8 | 0.62 |
gly | 7.8 | 5.8 | 0.74 | 7.8 | 1.5 | 0.19 |
pro | 7.8 | 4.8 | 0.62 | 7.8 | 2.6 | 0.33 |
his | 7.8 | 6.7 | 0.86 | 7.8 | 0.4 | 0.05 |
phe | 7.8 | 7.3 | 0.94 | 7.9 | 4.7 | 0.59 |
met | 7.8 | 7.2 | 0.92 | 7.8 | 4.3 | 0.55 |
Problema | | | 3 manchas | | |2manchas |

Cromatograma bidimensional tipo desarrollado en las 2 fases móviles |
No. De mancha | 1ª fase móvil | 2ª fase móvil | Aminoácido correspondiente |
| Frente del disolvente | Frente del soluto | Rf | Frente del disolvente | Frente del soluto | Rf | |
1 | 7.7 | 2.3 | 0.30 | 7.7 | 0.1 | 0.01 | arg |
2 | 7.7 | 2.7 | 0.35 | 7.8 | 0.2 | 0.03 | lys |
3 | 7.6 | 4.7 | 0.62 | 7.6 | 2.2 |0.29 | pro |
4 | 7.7 | 5.9 | 0.77 | 7.6 | 0.9 | 0.12 | gly |
5 | 7.7 | 6.3 | 0.82 | 7.6 | 0.2 | 0.03 | his |
6 | 7.7 | 6.3 | 0.82 | 7.6 | 1.5 | 0.20 | thr |
7 | 7.6 | 6.8 | 0.89 | 7.6 | 3.3 | 0.43 | glu |
8 | 7.6 | 6.7 | 0.88 | 7.6 | 3.4 | 0.45 | tyr |
9 | 7.7 | 7.0 | 0.91 | 7.5 | 4.4 | 0.59 | met |
10 | 7.6 | 7.1 | 0.93 | 7.5 | 4.2 | 0.56 | phe |

Cromatograma bidimensionalproblema desarrollados en las 2 fases móviles |
No. De mancha | 1ª fase móvil | 2ª fase móvil |
| Frente del disolvente | Frente del soluto | Rf | Frente del disolvente | Frente del soluto | Rf |
5 | 7.6 | 4.1 | 0.55 | 7.9 | 0.5 | 0.06 |
4 | 7.6 | 4.6 | 0.61 | 7.9 | 1.7 | 0.22 |
3 | 7.6 | 5.9 | 0.78 | 8 | 2 | 0.25 |
1 | 7.6 | 6.5 | 0.86 | 7.9 | 0.8 | 0.10 |
2 | 7.6 | 6.7 | 0.88 | 7.9| 1.2 | 0.15 |

No. de macha | Rf en la 1ª fase móvil | Rf en la 2ª fase móvil | Aminoácido correspondiente |
4 | 0.55 | 0.06 | lys |
3 | 0.61 | 0.22 | pro |
1 | 0.86 | 0.10 | gly |
2 | 0.88 | 0.15 | thr |

Preguntas extras
1. Investigar en la literatura los aminoácidos que contiene el jugo empleado como problema. Compare con sus resultados y concluya.
Treonina, serina,isoleucina, prolina, leucina, glicina, lisina, ácido glutámico, fenilalanina, tirosina, alanina. En el cromatograma número 4 (bidimensional) solo se observó la separación de 4 aminoácidos lys, pro, gly, y thr; esto pudo ser por la concentración de jugo de melón que se utilizó, o por la frescura de este, también puede ser que los aminoácidos que registra la bibliografía fueron obtenidos por otros métodos...