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UNIVERSIDAD NACIONAL AGRARIA LA MOLINA

CURSO: LABORATORIO DE ENZIMOLOGIA
PROFESOR: ADA DEL PILAR ALIAGA ROTA
INFORME Nº :
PRACTICA: DETERMINACION DE LA ACTIVIDAD ESPECIFICA DE FOSFATASA ACIDA.
ALUMNOS:
MONTANCHEZ HILARES WENDY.
GARCÍA CARLOS.
RAMOS DANAIT.
PARIASCA JULIO.
FACULTAD: CIENCIAS- BIOLOGÍA
GRUPO: “B*”
HORARIO: LUNES: 11:00-1:00PM

FECHA: 27 / 10 /14LIMA-PERÚ
DETERMINACION DE LA ACTIVIDAD ESPECIFICA DE FOSFATASA ACIDA
FUNDAMENTO
Conocer la actividad catalítica de las enzimas es de suma importancia, ya que, la medida de este parámetro puede servir en diversas áreas de la investigación, esto es, para la determinación de rangos óptimos de acción, comportamiento en su medio natural o factores que intervienen y modifican su actividad que sonpropias de cada enzima. Todo esto, permite tener un conocimiento de las enzimas y a partir de estos datos, tomar decisiones o tener consideraciones particulares para análisis posteriores como en diagnósticos o técnicas de producción que empleen a determinadas enzimas. (Campbell, 2004).
Una de las formas más comunes de determinar la actividad catalítica es medir la velocidad de la reaccióncatalizada por la enzima empleando un sustrato específico puesto que, es bastante complicado poder cuantificar en mg o moles la cantidad de enzima presente en una muestra. Esta cantidad se expresa en unidades por miligramo de proteína total (UE/mg), expresión que se denomina actividad específica. (Campbell, 2004).
En el presente informe primero se determinó la concentración de proteínas en el extractocrudo de hígado mediante el método de Biuret y posteriormente se determinó la actividad enzimática y concentración de proteínas en el extracto crudo, es decir, su actividad específica.
MARCO TEÓRICO
Para cualquier medida de actividad enzimática de deben tener en cuenta tres factores: producto transformado, tiempo de transformación y cantidad de enzima o preparación enzimática. Existen muchasformas de expresar la actividad enzimática, como la UI, unidad internacional, es la cantidad de enzima pura, material biológico o preparación que transforma un micromol de sustrato en un minuto, bajo condiciones definidas de pH, temperatura, concentración de sustrato y cofactores.
Otra forma de medición es la actividad enzimática, que es el número de micromoles de producto formado por minuto (UI) pormg de proteína (sea de enzima pura o de preparación), en condiciones óptimas de pH, temperatura, fuerza iónica y concentración saturante (Arriaga, 1996).
Recientemente se ha introducido el uso de “catal” que es la actividad enzimática capaz de transformar un micromol de sustrato en un segundo (Primo, 1995)
La actividad específica de una enzima es una medida indirecta de la fracción de laproteína total en una preparación que contiene a la enzima. La cantidad de proteína total presente en una fracción se obtiene determinando la concentración de proteína en una alícuota de cada fracción, y multiplicándola por el volumen total de la fracción.
Un método para la medición de proteínas por medio del método de Biuret, que es uno de los más exactos y más simples, recibe este nombre por elcompuesto biuret que se emplea en la medición.   Otro método es el método de Kjeldhal, pero es relativamente complicado y poco sensible.
La actividad catalítica de una enzima se mide en unidades de enzima y se define como unidad internacional de actividad enzimática, U, a la cantidad de enzima necesaria para transformar un micro mol de sustrato por minuto, a una temperatura determinada y en condicionesestandarizadas. (Peña, 2004).
La actividad específica es el número de unidades internacionales por mg de proteína (U/mg proteina) o por mililitro de disolución (U/ml). Estas formas de expresar actividad catalítica en una solución no requieren una purificación previa porque la medida de la actividad específica de una enzima es una medida indirecta de la fracción de la proteína total dentro de...