Siembra De S. Aureus

SIEMBRA DE S. AUREUS POR DILUCIONES
http://virus.usal.es/web/demo_microali/Saureus/SaureusPlaca.html#f

A. Introducción

Staphylococcus aureus es una especie bacteriana integrada por formas cocáceas de 0,8-1,0 mm de diámetro, que se dividen en más de un plano, por lo que se agrupan irregularmente en racimos. Son inmóviles y no forman esporas. Son grampositivas. Es una especie muy sensible ala acción del calor y de los desinfectantes.
Más del 50 % de las personas son portadoras de S.aureus en fosas nasales, garganta, forúnculos, manos o pelo. Por eso su presencia en determinados niveles en los alimentos es un signo evidente de falta de higiene en la manipulación.
Además algunas cepas de S.aureus son patógenas para el hombre porque producen enterotoxinas que dan lugar a laintoxicación estafilocócica. La dosis infectiva es alta ya que es necesario un número de al menos 106 ufc/g para producir cantidad suficiente de enterotoxina para producir la enfermedad en el consumidor.
En resumen, la presencia de un número elevado de Staphylococcus aureus en un alimento refleja higiene defectuosa por mala manipulación. Si, además, los S. aureus aislados son cepas enterotoxigénicas,suponen un riesgo para la salud.
Puede ocurrir que no se detecte S. aureus en un alimento, que el número detectado sea pequeño y que, sin embargo, exista cantidad detectable suficiente de enterotoxina estafilocócica. En este caso, los microorganismos que originaron la toxina han ido descendiendo en número e, incluso, desapareciendo, mientras que la toxina, por su mayor resistencia, permanece en elalimento.

El método de recuento en placa se utiliza cuando se sospecha que el alimento por analizar contiene más de 100 S. aureus por gramo.

B. Material
* Pipetas de 1 estériles
* Estufa de cultivo
* Asa de vidrio estéril
* Asa de cultivo
* Placas de Petri de 90 mm de diámetro

C. Medios de cultivo y reactivos
- Medio sólido selectivo Baird Parker (BP) Ver composición y preparación
- Caldo cerebro corazón (Brain Heart Infusión: BHI) Ver composición y preparación
- Plasma de conejo con ácido Etilen diamino tetraacético (EDTA)
Plasma de conejo, desecado y titulado, que evita reacciones falsas en la prueba de la coagulasa. Este producto se adquiere en casas comerciales.

D. Preparación de la muestra (Ver videoclip de preparación demuestra -requiere QuickTime-)(Esta película es más larga, en esta demo sólo podrá ver 20 segundos)
Preparación de la muestra |
  | Pesar en condiciones asépticas 10 gramos de muestra. | |
  | Añadir 90 ml de agua de triptona al 0,1%. | |
   | Homogenizar la mezcla en el Stomacher durante 1 a 4 minutos, el tiempo varía según el tipo de alimento. (Si no se dispone de stomacher puede homogenizarse en unatrituradora de cuchillas -tipo batidora- a  una velocidad aproximada de 14.000 rpm y en un tiempo medio de 60-90 segundos)Revivificación; dejar reposar 1 hora a 20ºC. | |

E. Preparación de las diluciones decimales
Preparación diluciones decimales |
  | A partir de esta, se preparan diluciones decimales sucesivas, tomando 1 mL de la primera dilución y descargándolo en un tubo que contenga 9mL de diluyente (agua de triptona al 0,1%) y así sucesivamente con las siguientes diluciones. | |
  | Mezclar manualmente cada dilución agitándola 25 veces en 7 segundos con movimientos ascendentes y descendentes formando un ángulo de abertura aproximado de 60º entre brazo y antebrazo.O mezclar mecánicamente utilizando un agitador Vortex. | |
  | De esta forma obtenemos las diluciones 10-2,10-3, 10-4, etc (es decir 1/100, 1/1000, 1/10000, etc.)Por tanto, los números 100, 1000 y 10000, etc. son los factores de dilución “D”. | |

F. Siembra por extensión en superficie  (Ver vídeoclip de la siembra -requiere QuickTime-)(Esta película es más larga, en esta demo sólo podrá ver 20 segundos)
Siembra placas de agar Baird Parker |
  | En esta etapa, se utiliza un medio de cultivo...