Siembra

-PRÁCTICA DE LABORATORIO 10 -

SIEMBRA BACTERIOLÓGICA (Cultivo de bacterias)

OBJETIVO Aprender a sembrar un exudado, una muestra, un material biológico al cual se le tiene que determinar el agente etiológico, bacteriológico o biológico. INTRODUCCIÓN Algunas técnicas microbiológicas La técnica más usada en el laboratorio de microbiología es probablemente la transferencia de microbios de unambiente a otro con el propósito de cultivarlos. Una vez realizados los pasos necesarios para aislar y propagar una cepa pura de algún microorganismo, el estudiante no debe escatimar cuidados para mantenerla libre de contaminantes. La cuestión sería mucho más sencilla si una vez aislada la cepa, ésta se pudiera mantener indefinidamente en el mismo recipiente original; pero los microbios, como lagente, requieren de una provisión de alimentos continua tanto como la eliminación constante de sus productos de desecho. Después de que una población de microorganismos ha estado creciendo por cierto tiempo en la misma probeta, debe ser transferida a un medio de cultivo nuevo, de otra manera el crecimiento y la supervivencia no pueden continuar. Por esto, y por otras razones, se han ideado variastécnicas de inoculación y subcultivo. El asa de inoculación se emplea para transferir el cultivo de una probeta a otra. En una probeta con agar, el crecimiento de los microorganismos se limita a la superficie del medio. Los organismos nunca se encuentran enterrados en el agar.

Paso por paso, el procedimiento de transferencia principia con el flameado del asa hasta que esté al rojo para luegoenfriarla por 10 a 15 segundos. Luego, con la otra mano se agarra la probeta de donde se van a tomar los microorganismos y se le quita la tapa (o el tapón de algodón). Sostenga la tapa con el dedo meñique de la mano derecha (si usted es diestro) hasta que sea tiempo de volver a tapar la probeta.

Nunca deje la tapa o algodón sobre la mesa porque eso contaminaría el cultivo. La boca de la probeta sepasa por la flama del mechero una o dos veces para destruir cualquier microbio indeseable que pueda haberse adherido al vidrio. Luego el asa estéril se introduce en la probeta y con ella se extrae un poco de material microbiano. Al sacar se vuelve a flamear la boca de la probeta y los organismos se depositan, ya sea dentro del medio cuando se trata de sopa de cultivo o medio líquido, o bien seraya con suma suavidad sobre la superficie de una probeta con medio sólido. Se saca el asa, se flamea la probeta y se vuelve a tapar. Finalmente, el asa se flamea al rojo para destruir los microorganismos adheridos a ella. Esta es la técnica básica que, si se sigue correctamente, le permitirá transferir sin riesgo más del 99% de todos los cultivos bacterianos que realice.

Aislamiento de un cultivopuro de bacterias El estudio organizado de cualquier organismo requiere que se examine una especie a la vez, el método analítico no se puede aplicar cuando se trata de mezclas de varias especies a la vez. Uno de los problemas más frecuentes en microbiología es el aislamiento de un cultivo puro de una especie bacteriana dada. Idealmente uno debería aislar una sola célula bacteriana individual yluego transferirla a un medio estéril hasta que se divida para generar muchas más bacterias, todas derivadas de una célula original.

Una población de este tipo se denomina clona y, en este caso uno puede tener certeza de que la herencia de cada miembro de la población es idéntica, excepto por las mutantes espontáneas. A pesar de que es muy difícil aislar una sola célula, existen técnicas capacesde aproximar este ideal aunque uno no puede tener certeza absoluta de haberlo logrado. Sin duda, la técnica más comúnmente empleada para lograr un cultivo puro es el método llamado sembrado en estrías. Generalmente se utiliza la caja de Petri por su gran superficie. Con un asa estéril se toma una pequeña cantidad de material microbiano y luego se desliza muy suavemente sobre el agar en la caja...