Significancia Y Alteraciones En El Metabolismo De Los Lípidos

Recientemente, un gran número de estudios se han centrado en las proteínas
porque se dio cuenta de que la información intacta la secuencia del genoma
no era suficiente para explicar y predecir los mecanismos celulares.
Las proteínas llevan a cabo y regular la mayor parte de las actividades celulares
y por lo general interactúan con las proteínas de vecinos y multiproteico forma
complejos deuna manera tiempo y el espacio-dependiente [1], o en respuesta a señales intra e intercelulares. Dentro de una proteína complejos, cada proteína individual tiene un papel importante dentro de la función de todo el complejo y la función que puede confiar en
asociación con otras proteínas. Esta combinación de proteínas puede proporcionar la regulación de la actividad de la proteína a través de laconformación transformación o modificación después de la traducción. Es cada vez más claro que la investigación funcional de las proteínas individuales en una organización compleja puede dar una mejor comprensión de sus funciones [2].
Pantallas de todo el genoma de la levadura de dos híbridos [3-5] y proteína chipbased
métodos [6] permite una visión más amplia sobre la interacción redes. Sinembargo, el sistema de dos híbridos de levadura sólo produce interacciones binarias y tiene el potencial de falsos positivos y resultados falsos negativos. En cuanto a chips de proteínas, la tarea de purificar y detectar las proteínas es mucho tiempo y mano de obra intensiva. Estos defectos pueden limitar su aplicación en el gran complejo de proteínas escala purificación. Una proteína genéricosestrategia de purificación de complejos, en tándem con nombre purificación de la afinidad (TAP) 1 [7,8], en combinación con la espectrometría de masas permite la identificación de socios de la interacción y la purificación de complejos de proteínas. Esta estrategia fue desarrollada originalmente
en la levadura y se ha probado en muchas células y organismos. Información general de las etiquetas de TAP yel método TAP El método TAP requiere la fusión de una etiqueta de TAP a la proteína diana. La etiqueta de PAT está integrado por dos unidades de enlace de IgG de la proteína A del Staphylococcus aureus (PROTA) y un dominio de unión a calmodulina (CBP), con un punto de corte para el virus jaspeado del tabaco (TEV) proteasa inserta entre ellos [7]. Además de la etiqueta TAP C-terminal, una etiquetade TAP N-terminal [8], que es una orientación inversa de la
Etiquetas TAP C-terminal, se generó también (fig. 1A).
El método TAP implica la fusión de las etiquetas de TAP a las proteínas de interés, ya sea en el C-o N-terminal, y la transformación de la construcción en los organismos de acogida adecuados. Proteína complejos que contiene la proteína TAP-etiquetados son purificadas de extractosde células por dos medidas concretas afinidad purificación (Fig. 2).
El método TAP tiene muchas ventajas para la investigación de las proteínas complejos y las interacciones. En primer lugar, el sistema del PAT permite una rápida en una gran escala de análisis del proteoma sistemática. Debido a estas ventajas, el método TAP ha aplicado con éxito en el la investigación de las interaccionesproteína-proteína en procariotas y eucariotas células.

Aplicación del método TAP Con el desarrollo del enfoque de TAP en la última década, este método se ha empleado en el análisis de proteínas interacciones de las proteínas y complejos de proteínas en diversos organismos, incluyendo hongos, mamíferos, plantas, Drosophila y bacterias (Tabla 1) [9].
TAP en la levadura El método TAP fuedesarrollado originalmente para el análisis de proteínas complejos en la levadura en condiciones casi fisiológica. Gavin
et al. [10] utilizados TAP en el análisis a gran escala de múltiples proteínas complejos en Saccharomyces cerevisiae, en la que 589 proteínas marcadas
se purificaron con éxito y fueron las proteínas asociadas aislados e identificados. Más tarde, el mismo grupo de investigación...