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EFECTO DEL CRIOPROTECTOR DIMETILFORMAMIDA SOBRE LA
VIABILIDAD DE EMBRIONES BOVINOS PRODUCIDOS IN VITRO

JOHN JAIRO GIRALDO GIRALDO

UNIVERSIDAD NACIONAL DE COLOMBIA
SEDE MEDELLÍN
FACULTAD DE CIENCIAS
2011

EFECTO DEL CRIOPROTECTOR DIMETILFORMAMIDA SOBRE LA
VIABILIDAD DE EMBRIONES BOVINOS PRODUCIDOS IN VITRO

JOHN JAIRO GIRALDO GIRALDO
Tesis de Grado presentada para optar el Títulode
Magíster en Ciencias - Biotecnología

Director
NEIL ALDRIN VÁSQUEZ ARAQUE
Biólogo, M.Sc, Dr. Sc (c)

Codirector
JORGE GÓMEZ OQUENDO
Médico Veterinario

UNIVERSIDAD NACIONAL DE COLOMBIA
SEDE MEDELLÍN
FACULTAD DE CIENCIAS
2011

2

CONTENIDO

RESUMEN ....................................................................................................................10
1.INTRODUCCIÓN .....................................................................................................12
2. MARCO TEÓRICO..................................................................................................14
2.1. Producción in vitro de embriones ........................................................................14
2.2. Criopreservación de embriones............................................................................15
2.2.1. Vitrificación vs congelamiento convencional .............................................17
2.2.2. Vitrificación ...............................................................................................18
2.2.3. Devitrificación ............................................................................................242.3. La dimetilformamida como crioprotector ............................................................25
2.4. Criotolerancia........................................................................................................26
2.5. Peroxidación lipidica ............................................................................................29
2.5.1. Proceso de la peroxidación lipidica.............................................................29
2.5.2. Como medir el daño oxidativo.....................................................................31
2.5.3. Determinación de sustancias reactivas de oxigeno EROS con el ácido cis
parinarico (CAP) ....................................................................................................31
2.5.4. Usos de la2,7-Dichlorodihydrofluoresceina Diacetato (H2DCFDA)

…32

3. OBJETIVOS ..............................................................................................................34
3.1. Objetivo general ....................................................................................................34
3.2. Objetivos específicos............................................................................................34
4. METODOLOGÍA......................................................................................................35
4.1. Localización ..........................................................................................................37
4.2. Procesamiento del material de estudio..................................................................37
4.3Maduración in vitro de oocitos ..............................................................................38
4.4 Fertilización in vitro ..............................................................................................39
4.5 Desarrollo in vitro .................................................................................................40
4.6 Vitrificación y criotolerancia.................................................................................42
4.6.1. Vitrificación de embriones...........................................................................42
4.6.2. Devitrificación de embriones .......................................................................44
4.6.3. Determinación de la criotolerancia y la morfología embrionaria ................45
4.7...