Southern Blot

Southern Blot
Edwin Mellor Southern
Objetivos
Conocer técnicas, equipamiento y tecnologías utilizadas en biología molecular
Definir fundamentos teóricos de las técnicas biotecnológicas¿Cómo estudiar la expresión de diversos genes? Southern, Northern y Western Blot
Existen diferentes técnicas que emplean la separación en gel por electroforesis como primer paso paraidentificar lapresencia de determinadas moléculas dentro de una muestra. Una de ellas fue inventadapor
Edward M. Southern
en 1975 para la detección de ADN. Una vez finalizada la corrida en el gel, serealiza latransferencia (o blotting) de las muestras a una membrana para su posterior revelado. Luegose utilizó el mismo sistema para detectar ARN y se lo denominó
Northern Blot
(en clara alusión alnombre delcientífico inventor de la técnica basada en ADN).Estas dos técnicas consisten en una electroforesis seguida de transferencia y emplean secuenciasespecíficas (
sondas
) complementarias a la molécula deácido nucleico a identificar. Es decir, ambasutilizan la hibridación de ácidos nucleicos para la detección de las moléculas buscadas. Los principiosgenerales son los mismos, pero hay diferencias en elprocedimiento debidas principalmente a que elARN se degrada mucho más fácilmente que el ADN; esto hace necesario tomar muchas másprecauciones.Una vez sembradas las muestras en un gel, se realiza unacorrida electroforética hasta lograr que lasmoléculas se separen por tamaños de manera tal que se puedan distinguir las buscadas. Luego setransfieren los ácidos nucleicos del gel a la membrana. Deesta manera los que quedan retenidospueden ser sometidos a ensayos de hibridación con sondas específicas para detectar la presencia dedeterminadas secuencias.
Estas dos técnicas persiguen finesdistintos: el Southern Blot, que detecta la presencia de ciertassecuencias en el ADN, se usa, por ejemplo, para estudiar mutaciones en el genoma. El Northern, encambio, permite detectar qué genes son...