Subunidad Nr1 Del Nmdar
Páginas: 2 (367 palabras)
Publicado: 2 de octubre de 2012
ANÁLISIS in vivo DE FRAGMENTOS DE LA SUBUNIDAD NR1 DEL NMDAR GENERADOS POR ECTODOMAIN SHEDDING
Berber Aceves Guadalupe Eréndira1, Morales Rodríguez Silvia2, Santamaría del Ángel Abel 2 y Montesde Oca B. Pavel2.
1Unidad Profesional Interdisciplinaria de Biotecnología.
2 Instituto Nacional de Neurología y Neurocirugía
El receptor ionotrópico de glutamato (NMDAR) es tetramérico formadopor 2 subunidades NR1 y 2 subunidades NR2. El glutamato es un neurotransmisor excitador abundante en el Sistema Nervioso implicado en numerosas funciones como son el aprendizaje, la memoria y laPotenciación a Largo Plazo. El procesamiento de Ectodomain Shedding (ES) es una modificación postraduccional de moléculas de membrana que ha adquirido una gran importancia en la última década. Este corteproteolítico mediado por metaloproteasas de matriz (MMP) y ADAM’s, genera fragmentos intra y extracelulares que poseen una función fisiológica central en diferentes procesos. En cultivos de neuronas seha demostrado el ES de la subunidad NR1 mediado por MMP-3 dependiente de su actividad. Nuestro trabajo consiste en investigar si el procesamiento proteolítico del NMDAR mediado por metaloproteasas selleva a cabo in vivo en corteza de cerebro de rata. Para alcanzar este objetivo se utilizarán ratas macho de la cepa Wistar, tratadas vía intraperitonial con vehículo o MK-801. Después de 3h seobtendrá la corteza cerebral mediante disección y se homogenizará en buffer de lisis. Las fracciones soluble e insoluble se separarán por centrifugación. 20 o 120 µg respectivamente se separarán medianteSDS-PAGE a 120V aproximadamente 2h. Las proteínas se transferirán a una membrana de nitrocelulosa toda la noche a 40V en agitación a 4⁰C. La membrana se bloqueará con leche 0.5% en TBS 0.5%tween-20(T-20) 1h. Después de 3 lavados con TBS 0.5% T-20 de 10min c/u, la membrana se incubará con el Ab primario en TBS 0.1% T-20 (anti-NR1 intracelular) 1h. La membrana se lavará 3X con TBS 0.5% T-20 de...
Berber Aceves Guadalupe Eréndira1, Morales Rodríguez Silvia2, Santamaría del Ángel Abel 2 y Montesde Oca B. Pavel2.
1Unidad Profesional Interdisciplinaria de Biotecnología.
2 Instituto Nacional de Neurología y Neurocirugía
El receptor ionotrópico de glutamato (NMDAR) es tetramérico formadopor 2 subunidades NR1 y 2 subunidades NR2. El glutamato es un neurotransmisor excitador abundante en el Sistema Nervioso implicado en numerosas funciones como son el aprendizaje, la memoria y laPotenciación a Largo Plazo. El procesamiento de Ectodomain Shedding (ES) es una modificación postraduccional de moléculas de membrana que ha adquirido una gran importancia en la última década. Este corteproteolítico mediado por metaloproteasas de matriz (MMP) y ADAM’s, genera fragmentos intra y extracelulares que poseen una función fisiológica central en diferentes procesos. En cultivos de neuronas seha demostrado el ES de la subunidad NR1 mediado por MMP-3 dependiente de su actividad. Nuestro trabajo consiste en investigar si el procesamiento proteolítico del NMDAR mediado por metaloproteasas selleva a cabo in vivo en corteza de cerebro de rata. Para alcanzar este objetivo se utilizarán ratas macho de la cepa Wistar, tratadas vía intraperitonial con vehículo o MK-801. Después de 3h seobtendrá la corteza cerebral mediante disección y se homogenizará en buffer de lisis. Las fracciones soluble e insoluble se separarán por centrifugación. 20 o 120 µg respectivamente se separarán medianteSDS-PAGE a 120V aproximadamente 2h. Las proteínas se transferirán a una membrana de nitrocelulosa toda la noche a 40V en agitación a 4⁰C. La membrana se bloqueará con leche 0.5% en TBS 0.5%tween-20(T-20) 1h. Después de 3 lavados con TBS 0.5% T-20 de 10min c/u, la membrana se incubará con el Ab primario en TBS 0.1% T-20 (anti-NR1 intracelular) 1h. La membrana se lavará 3X con TBS 0.5% T-20 de...
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