Succinato Deshidrogenasa

INSTITUTO POLITECNICO NACIONAL
ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIÓLOGICAS

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGÍA.
LABORATORIO DE FISIOLOGIA Y BIOQUÍMICA MICROBÍANA.

PRACTICA N° 3
Determinación de actividad de succinato deshidrogenasa de Escherichia coli.

NOMBRES:
* Amaro Rodríguez Samanthia
* Ortiz Álvarez Jossue Mizael
* Rodríguez Ramírez Viridiana
* Urzúa Abad María MagdalenaGRUPO:
6QM2
EQUIPO:
1

Practica N° 3
Determinación de actividad de succinato deshidrogenasa Escherichia coli.

Hipótesis
Si la actividad de la enzima Succinato Deshidrogenasa está ligada al crecimiento de Escherichia coli de acuerdo a la fuente de carbono más fácilmente asimilable, entonces la enzima tendrá su máxima actividad cuando la bacteria crezca en glucosa y será menor cuando estécreciendo con succinato de sodio.
Diseño experimental
Para realizar este procedimiento se hizo como primer paso la obtención de la suspensión celular; el cual consistió en tomar una asada de un medio de cultivo inclinado de la cepa silvestre de E. coli e inocular 2 matraces Erlenmeyer en los cuales estaba contenido el medio Sypher y Strauss, uno de estos contenía glucosa y el otro conteníasuccinato, con fuentes de carbono, para que se llevara el crecimiento de la cepa, posteriormente se incubaron a 37 °C en agitación con el fin de proveer oxigeno al medio. Las células se cosecharon en condiciones de esterilidad y fueron lavadas con regulador de fosfatos igualmente estéril y se re suspendieron con regulador de fosfatos, continuando con el procedimiento se inocularon cuatro matraces delos cuales dos fueron inoculados con células crecidas en succinato pero a uno se le adiciono con fuente de carbono succinato y al otro glucosa; los otros dos matraces fueron inoculados con células crecidas en glucosa pero igualmente que en los otros matraces a uno se le adiciono como fuente de carbono succinato y al otro glucosa se incubo a 37 °C de estos matraces se leyó la absorbancia inicial yla absorbancia final pasadas las horas de incubación esto con el fin del medir la densidad de crecimiento del cultivo.
Ahora bien continuando con el procedimiento se llevo a cabo la determinación del efecto de la fuente de carbono sobre la actividad de la enzima succinato deshidrogenasa en el que en una celda de espectrofotómetro se adicionaron los siguiente reactivos : succinato de sodio comosustrato a oxidar por la enzima, regulador de fosfato para mantener en pH optimo a la enzima, KCN como inhibidor de la cadena transportadora de electrones, metosulfato de fenazina como aceptor artificial de electrones, 2,6 diclorofenol indofenol igualmente como aceptor artificial de electrones cedidos por el metosulfato de fenazina y por último la suspensión celular la cual provenía delprocedimiento anteriormente mencionado por lo tanto se realizaron cuatro tratamientos uno para succinato/succinato, succinato/glucosa, glucosa/succinato y glucosa/ glucosa , se leyó %Transmitancia a 600 nm registrando lectura cada minuto.
Objetivo
Con base al crecimiento y a la actividad enzimática obtenidos bajo diferentes condiciones de cultivo, el alumno analizara los resultados obtenidos concluyendocual es el papel fisiológico de la enzima en escherichia coli.

Registro de datos
1. Efecto de la fuente de carbono en el crecimiento de E. coli.

Cultivos previos en: | Matraces con medio base | + fuente de C | Crecimiento(Absorbancia a 600 nm) |
| | | Inicial | Final |
Succinato | 1 | Succinato | 1.022 | 1.290 |
| 2 | glucosa | 1.110 | 1.333 |
glucosa |3 | Succinato | 1.108 | 1.370 |
| 4 | glucosa | 1.014 | 1.372 |

2. Efecto de la fuente de carbono en la actividad de succinato deshidrogenasa.

Tiempo(seg) | % de transmitancia a 600 nm de las suspensiones celulares crecidas en las fuentes de carbono: |
| 1Succinato-succinato | 2Succinato-glucosa | 3glucosa-succinato | 4glucosa-glucosa |
0 | 9.3 | 0 | 11 | 0 | 15.4 | 0 | 8.5 |...