Suthern Blot, Western Blot, Northern Blot

Southern blot
En 1975 Edward M. Southern inventó una técnica que permite la identificación de secuencias específicas de DNA, mediante el uso de electroforesis en gel y de hibridación utilizando sondas específicas; llamada Southern blot.
Para analizar una muestra de DNA cromosomal, ésta debe ser previamente fragmentada utilizando enzimas de restricción. Los fragmentos obtenidos se separan, demayor a menor tamaño mediante una electroforesis en gel de agarosa. Una vez que termina la electroforesis y sin teñir el gel, los fragmentos de DNA se traspasan aun filtro de nitrocelulosa ó a una membrana de nylon. Después el filtro se incuba con una sonda específica marcada para la secuencia que se desea identificar. Esta sonda es una secuencia de ácido nucleico, DNAds ó RNAm, que reconocerá a lasecuencia de DNA inmovilizada en el filtro, a través del reconocimiento de secuencias complementarias de ácidos nucleicos. El traspaso de las muestras desde el gel al filtro es una etapa esencial, ya que el reconocimiento de bases complementarias entre sonda y secuencias de DNA en el gel es muy ineficiente.

Técnica de hibridación del Southern blot
1. Extracción del ADN
2. Digestióndel ADN con una endonucleasa de restricción
3. Electroforesis en gel de agarosa
4. Preparación de un ensayo de Southern
5. Hibridación con sonda radioactiva
6. Detección de los RFLPs mediante autorradiografía
7. Reensayar el resultado del Southern con sondas adicionales.

Northern blot
Es una técnica de laboratorio que se utiliza para identificar y localizar las secuenciasde ARNm que son complementarias a un fragmento de ADN o ARN llamado sonda. El análisis Northern es una prueba para detectar la presencia del ARNm en un tejido en particular, la cual permite determinar el tamaño de la trascripción del ARNm. El procedimiento se hace transfiriendo todo el ARNm de un tipo determinado de tejido desde un gel a una membrana de nylon o nitrocelulosa. La presencia de un ARNen particular se detecta hibridizando esta membrana con una sonda de ácido nucleico, generalmente de ADNc o ARNr del gen de interés.
Es similar a la técnica Suthern, solo que ésta permite detectar RNA en vez de DNA. La técnica consiste en:
* Extraer el RNA de las células pertinentes
* Separación por tamaño mediante electroforesis en gel
* Las moléculas de RNA son transferidas yunidas al filtro
* Después de la hibridación con una sonda marcada (y posterior a la detección según el método de marcaje utilizado), las bandas en el gel indican la ubicación de los tipos de RNA que sean complementarios a la sonda.
* Teniendo marcadores de RNA de tamaño adecuado, se puede conocer el tamaño de los RNA que se han identificado.
Así, la técnica permite conocer el tamañopreciso de un mRNA, luego del empalme transcripcional; además sirve para identificar diferentes tipos de mRNA codificados por un mismo gen y para determinar la cantidad y el tejido específico (o tipo de células) en que se encuentra un mRNA específico.
Así, es posible determinar los niveles de actividad génica, por ejemplo durante el desarrollo, o en distintos tejidos (o tipos celulares) durante unperíodo definido de la vida, o después de haber sometido a los organismos a diferentes estímulos fisiológicos.

Western blot
La técnica del Western Blot (también llamado “inmunoblotting” debido a que se utilizan anticuerpos para detectar el antígeno o los antígenos específicos de interés) fue descrita por primera vez por Towbin et al. en 1979.
Deriva de la electroforesis en gel y separa proteínasmediante la utilización de anticuerpos específicos. Una vez quela muestra con las proteínas que se quiere identificar ha corrido en un gel, se transfiere a una membrana especial donde las proteínas quedan “ancladas” o adheridas. Después, se incuba esta membrana con el anticuerpo específico contra la proteína blanco, y se revela.
Con esta técnica pueden obtenerse datos aproximados del tamaño...