Tècncas de recuento de microorganismos

Universidad de Santiago de Chile
Facultad Tecnológica
Departamento de Ciencias y Tecnología de los Alimentos

Autores: Magaly Valderrama/Rosa Miranda
Carrera: Tecnólogo en Alimentos
Curso: Microbiología de los Alimentos
Fecha: 16/05/2011

Informe de Laboratorio de Microbiología
Práctico 5

“Técnica de Recuento de Microorganismos”

Objetivo

• Efectuar recuentos en placas yrecuentos directos de microorganismos.

Introducción

El crecimiento es la capacidad para multiplicarse que tienen las células individuales, esto es iniciar y completar una división celular. De esta forma, se considera a los microorganismos como partículas discretas y el crecimiento es entendido como un aumento en el número total de partículas bacterianas. Existen muchas técnicas paradeterminar el número de microorganismos en una muestra: hay recuentos en Placa, Filtros de Membrana, Microcolonias en DEFT (epifluorecencia), Gotitas de Agar, Films secos (Petrifilm), Método del número más probable, Métodos basados en la reducción de colorantes, Tubos rodantes, Recuento microscópico directo, y además de estas técnicas basadas en la formación de colonias observables (TécnicasBiológicas), hay otra serie de procedimientos de recuento basados en técnicas biológicas, físicas y químicas.
En esta experiencia se realizó el Recuento Microscópico Directo, con el tipo de cámara más usado, que es la cámara de Neubauer. Este recuento tuvo una única desventaja, ya que no permitió discriminar entre células vivas y muertas (viabilidad celular).
También se aplicó el recuento en placa de unamuestra de alimento, donde se obtuvo el número total de microorganismos presentes en una muestra de pan con pollo y agregados. Para lograr esto, se mezcló y homogenizó la el alimentos, se diluyó en forma seriada, se sembraron diluciones en la profundidad de un agar, y se incubó a la temperatura apropiada durante un tiempo determinado.

Procedimiento Experimental

ACTIVIDADES:

I) Recuentode una suspensión de Levaduras con cámara de Neubauer:

1. Se agitó el tubo que contenía la suspensión de Levaduras.
2. Se preparó la cámara de Neubauer. Para esto, se limpió el cubreobjetos con algodón y alcohol yodado.
2. Se colocó el cubreobjetos sobre la superficie de conteo.
4. Con una pipeta Pasteur seca, se sacó un pequeño volumen de la suspensión de Levaduras, yposteriormente se colocó en la superficie bajo el cubreobjetos.
5. Se enfocó la muestra con el objetivo 10x del microscopio, y luego se observó con el objetivo 40x.
6. Se procedió a contar las células centrándonos en un cuadro específico, para luego contar los 4 cuadros que están en las esquinas de este.
7. Después del conteo, se retiró el cubreobjetos, y se lavó cuidadosamente junto con lacámara de Neubauer, con agua destilada. Se secó con papel absorbente y se guardó.
8. Se calculó el número de células por mL.

II) Recuento en placa de una muestra de Alimento:

Muestra: Pan con pollo, Mayonesa y kétchup.

1. Se encendió el mechero.
2. Se esterilizó la espátula, pinza y bisturí utilizados, con alcohol para luego flamearlas en el mechero.
3. Se trituró elalimento en trozos pequeños.
4. Se masó 10 g de la muestra en una placa petri estéril.
5. Se traspasó la muestra a un matraz Erlenmeyer el cual contenía 90mLde Caldo Peptonado.
6. Se colocó la muestra en un Agitador Vortex para su Homogenización durante unos minutos, obteniéndose la dilución 1:10. Luego se rotuló.
7. Con una pipeta estéril se transfirió 1mL de la dilución a un tubo quecontenía 9mL de caldo peptonado.
8. Se agitó el tubo con la solución en el Agitador Vortex para tubos durante 30 segundos, obteniéndose la dilución 1:100. Luego se rotuló.
9. Utilizando esta última dilución obtenida, se sacó 1mL con una pipeta estéril la cual se colocó en otro tubo con 9mL de caldo peptonado.
10. Se colocó la nueva solución en el Agitador Vortex durante 30 segundos,...