TÉCNICA DE DISOCIACIÓN DE ANTICUERPOS

INMUNOFLUORESCENCIA
Identificar y localizar Ag en el interior o

superficie de la célula
Fluoresceina fijado a una molécula de Ac
Métodos directos e indirectos
Actualmente :CMF:cuantificar hemorragia
maternofetal,identificar cél transfundidas y
seguimiento de la supervivencia

ENZIMOINMUNOANÁLISIS
 Medir Ag o Ac
Fosfatasa alcalina puede unirse a moleculas

de Ac sin destruirsu especificidad
Utilizada para unir Ig unida a GR y demostrar
hemorragia fetomaterna

PRUEBA DE ADHERENCIA DE
GR
EN
FASE
SÓLIDA
 PRUEBA DIRECTA:
 Ac fijado a la microplaca y se agregan GR
 (+) GR se adhieren a los bordes
 (-) GR se asientan en los bordes
 PRUEBA INDIRECTA
 GR con Ag conocido unidos a una placa pretratada con

glutaraldehido y poli-lisina, Ac especifico
Se agrega suero ,incubar,lavar proteinas remanentes
 Indicador para el Ac fijado GR recubiertos con IG
 Interpretación : Idem

PRUEBA DE ADHERENCIA DE
GR EN FASE SÓLIDA

PRUEBA DE GEL
Utiliza microtubos contenidos en una tarjeta de

gel.Este formato permite la centrifugación
simultánea de los tubos(6) en equipos
especialmente diseñados
La incubación del Ac con los GR ensuspención se
realiza en la parte superior del tubo ,luego se
centrifuga para que los GR entren en contacto con
el As que baña el gel
Los geles actúan como filtro,reteniendo los
aglutinados y dejando pasar los GR libres que se
depositan en el fondo

EXISTEN 3 FORMULACIONES BÁSICAS
DEL GEL
Gel neutro:
Solo contiene la matriz del gel-sephadex

para detección deaglutinados producidos porAc aglutinantes
Prueba inversa ABO,investigación de Ac frios y
pruebas enzimáticas

Gel especifico:
Mezcla de gel-sephadex contra un Ag de

gr sanguineo
Determinación de Gr sanguineo
Gel antiglobulina:
Se usa en la P de Coombs para identificar
Ac antieritrocitarios incapaces de producir
aglutinación directa

Puede ser utilizado para detectar e identificar

Ags yAc,pruebas de compatibilidad
pretransfusional
En los tubos que contiene el panel ABO,el gel
está en medio salino,mientras que en los del
panel selector está en reactivo de Coombs
VENTAJAS:
Puede efectuarse técnicas en ½ salino,

enzimático,antiglobulinico
Es automatizable
DESVENTAJAS:
Costo y equipamiento

Partículas de gel :filtros que atrapan los
aglutinados
Aglutinadosgrandes:Parte superior
Aglutinados pequeños: Parte Inferior
No aglutinados :extremos en pico
APLICACIONES:
Detectar e identificar Ac o Ag
Pruebas de compatibilidad

Prueba Funcional: ERITROFAGOCITOSIS
En 3 portaobjetos colocar 1,5 ml. de sangre del
paciente recién extraída e incubar durante 60
minutos a 37C en cámara húmeda. Retirar el coágulo
formado y lavar las células obtenidas por sucapacidad de adherirse al vidrio con una solución de
Hanks a 37C.
Preparar las siguientes suspensiones al 5% en
solución fisiológica:
a) Hematíes Propios (HP)
b) Hematíes Normales (HN)
d) Hematíes Normales Sensibilizados (HNS) con anti-D
(clase IgG) diluido convenientemente.

A 2,5 ml de las mismas agregar 1 ml de suero
humano fresco compatible y 1,5 ml de solución de
Hanks.
Incubarlos portaobjetos con 1 ml de cada
una de estas mezclas durante 3 hs. a 37C en
cámara húmeda. Posteriormente lavar con
solución de Hanks a 37C.
Fijar las células mononucleares obtenidas
con metanol durante 1 minuto y colorear con la
tinción de May Grunwald Giemsa.
Realizar la observación microscópica de los
preparados contando 200 elementos y calcular los
porcentajes de célulasfagocíticas activas (CFA).

Imágenes de
eritrofagocitosis

CF
A

GRs
adheridos

GR
fagocitado

-INHIBICIÒN DE LA HEMAGLUTINACIÒN:
 Neutraliza un Ac especìfico con su sustancia soluble

correspondiente en las pruebas de identificaciòn de Ac
( ùtil cuando se trabaja con muestras sèricas que
contienen mùltiples especificidades)
 TRATAMIENTO ENZIMÀTICO:
 Se utilizan para tratar Gr...