Técnicas Biotecnológicas

Objetivo del trabajo Realizacin de un Southern Blot para la deteccin de una secuencia especfica de ADN en material gentico.  INDICE Pg Diseo global de la experiencia 3Trabajo Prctico n 1 - Aislamiento y Purificacin de ADN 6 Ejercicio de laboratorio 1 - Obtencin de medidas espectrales de cidos nucleicos. Cuantificacin por densidad ptica. 24 Ejercicio de laboratorio 2 - Preparacin de geles de agarosa y corrida electrofortica de patrones de peso molecular. Cuantificacin por gel.28 Trabajo Prctico no. 2 - Tratamiento de ADN con exo y endonucleasas Anlisis del ADN purificado y digerido mediante electroforesis. 32 Trabajo Prctico 3 - Generacin de sondas para Southern blot mediante PCR 44 Trabajo Prctico 4 - Southern blot -Electroforesis y transferencia de ADN a una membrana de nylon. 49 Trabajo Prctico 5 - Southern blot Hibridizacin del ADN transferido con sondas especficas y su revelado 58  Diseo global de la experienciaTrabajo Prctico n 1 - Aislamiento y Purificacin de ADN Objetivo parcial Aislamiento y purificacin del plsmido TOPO-EGFP, se realizar segn el protocolo experimental descripto en el SOP1 del presente informe. Trabajo Prctico n 2 Tratamiento de ADN con exo y endonucleasas Anlisis del ADN puruficado y digerido mediante electroforesis Objetivos parciales Observar el efecto del agregado de ADNasa yARNasa en las preparaciones de ADN plsmido TOPO-EGFP. Manipular ADN plsmido TOPO-EGFP in vitro mediante cortes con enzimas de restriccin Ncol y Xhol. Visualizacin de ADN plsmido TOPO-EGFP y su patrn de digestin mediante electroforesis en gel de agarosa. Trabajo Prctico n 3 - Generacin de sondas para Southern blot mediante PCR Objetivos parciales Obtener una sonda marcada de ADN doble cadena parareconocimiento de una secuencia especfica de ADN, utilizando PCR. Evaluar la sensibilidad de la PCR a partir del clculo de la mnima cantidad de molculas necesarias para dar un resultado positivo. Trabajo Prctico n 4 Southern Blot Electroforesis y transferencia de ADN a una membrana de nylon. Objetivos parciales Resolver molculas de ADN de distintos tamaos presentes en una mezcla. Transferir lasmolculas separadas a una membrana de Nylon para su posterior identificacin. Trabajo Prctico n 5 Southern Blot Hibridizacin Del ADN transferido con sodas especficas y su revelado Objetivo Identificar una regin del ADN con una secuencia nucleotdica especfica mediante su hibridizacin con una sonda. Trabajo Prctico Nro. 1 Aislamiento y Purificacin de ADN Protocolo de aislamiento para ADNplasmdico.SOP NAnexo NPgina N 740-006-02 1. PROPOSITO Aislamiento y purificacin de ADN plasmdico de forma casera y con kit comercial a partir de sepa con plsmido TOPO EGFP. 2. ALCANCE Alumnos, tcnicos y personas con conocimientos previos en Biologa y Fisiologa molecular y Gentica molecular. 3. RESPONSABILIDAD Alumnos de Tcnicas BiotecnolgicasTodo Alumno es responsable de Seguir paso a paso elprotocolo recibido por los docentes con sus respectivas correcciones. DocentesEl docente es responsable de Proporcionar al alumno del marco terico del protocolo para su comprensin. 4. SALUD, SEGURIDAD y MEDIO AMBIENTE Los siguientes reactivos pueden ser un potencial peligro para la salud del usuario HIDROXIDO DE SODIO lcali fuerte. Evitar contacto con la piel. Usar guantes. ACIDO ACETICO Inflamable....