Técnicas De Microbiología

Técnicas habituales utilizadas en el Laboratorio de Microbiología para la identificación bacteriana
Jiménez Mario Emilio*, Lara Cesar*, Leiva María José*
*Universidad de Concepción, Facultad de Ciencias Biológicas, Departamento de Microbiología

Resumen
Las bacterias son microrganismos unicelulares procariotas, que en el laboratorio de microbiología se pueden clasificar por su forma,agrupación y afinidad tintorial por la Tinción de Gram. En base a ella se han de utilizar distintas pruebas Bioquímicas para la identificación de la bacteria, sustentadas en las propiedades de estos microrganismos. Se identificaron Gram positivas Sthaphylococcus aureus, Staphylococcus saprophyticus y Estreptococcus pyogenes, y para bacterias Gram negativa en todos los casos se identificó Escherichiacoli.

Introducción.

Las bacterias son microorganismos procariotas, unicelulares, sin membrana nuclear, mitocondrias, aparato de Golgi ni retículo endoplásmico, que se reproducen por división asexual y tienen un pequeño tamaño, de tan solo micras1

Se pueden clasificar por su forma en cocos, bacilos y espirales. Asimismo, se pueden clasificar de acuerdo a la manera en la que se agrupación queadopten pudiendo ser en cadena, racimo, en parejas, en tétradas, o simplemente sin agrupación específica1.

Para el estudio de bacterias, el laboratorio necesita que éstas crezcan y se reproduzcan. Para ello se cuenta con una amplia gama de medios de cultivo, tanto sólidos como líquidos los cuales contienen los elementos nutricios necesarios para la multiplicación y desarrollo bacteriano,permitiendo de ese modo el aislamiento, estudio y tipificación de las bacterias2.

Es importante, en el laboratorio, obtener cepas puras de una determinada bacteria debido a que sólo de ese modo se obtiene un estudio fidedigno del microorganismo y será posible obtener un diagnóstico adecuado. Para que esto se cumpla es esencial trabajar en un ambiente aséptico y que el método de siembra permitaobtener colonias aisladas2.

Una vez obtenida la colonia aislada se pueden realizar los estudios bacterianos. Estos consideran un análisis macroscópico en el cual se evalúa la colonia en función de su tamaño, forma, color, olor, si presenta o no hemólisis y si el agar cambia de color. En los medios líquidos es importante observar la presencia de turbidez y cambios de color si es que los hay2.

Elanálisis microscópico se puede hacer de dos maneras: al fresco y usando frotis con tinciones. La observación al fresco permite ver la forma, agrupación y movimientos que presenta una bacteria. Por otro lado el uso de tinciones permite ver estructuras que no se observan al fresco y además permite diferenciar bacterias, como es el caso de la tinción Gram que diferencia a las bacterias por sucontenido de peptidoglicán en gram positivas y Gram negativas3.

En base a la tinción de Gram que presente las bacterias existen diferentes pruebas bioquímicas que permiten una identificación exitosa del microorganismo. Para las bacterias Gram positiva existen pruebas como la catalasa, coagulasa, resistencia a novobiocina. Mientras que para los Gram negativo existen varios medios que en conjuntopermiten una identificación de la bacteria. Estos medios son TSI, LIA, MIO, Urea de Christensen y Citrato de Simmons. Asimismo, existe un grupo de bacterias Gram negativas denominadas no fermentadoras que no pueden ser identificadas mediante la escala bioquímica, sin embargo para estas se utilizan otras pruebas como la oxidación y la citocromo oxidasa además de una análisis al fresco3.

En esteinforme se detalla el análisis macro y microscópico de una bacteria obtenida de tres muestras de orina. También se documenta la identificación de tres muestras problemas que contenían una bacteria Gram positiva y una Gram negativa cada una. Del mismo modo se muestran las pruebas que se usaron para identificar Pseudomona auroginosa y Acinetobacter sp.

Materiales y métodos:
Materiales:
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