Técnicas De Reacción Antígeno-Anticuerpo.

TÉCNICAS DE REACCIÓN ANTÍGENO-ANTICUERPO.

OBJETIVOS:
* Explicar mediante representación esquemática e imágenes las diferentes Técnicas simples de reacción antígeno-anticuerpo.
* Conocer algunas utilidades y aplicaciones practicas

MARCO TEÓRICO:
CLASIFICACIÓN:
Técnicas simples
* Precipitación
* Aglutinación
* Fijación del Complemento

Reacción De Precipitación
Lareacción de precipitación ocurre cuando se combina un anticuerpo, con un antígeno soluble y esto conlleva a la formación de agregados que precipitan. Para que la precipitación ocurra en forma máxima se necesita que tanto el antígeno como el anticuerpo estén en concentraciones óptimas, cuando cualquiera de los reaccionantes están en exceso no se pueden formar grandes agregados antígeno-anticuerpo.Precipita especialmente IgG
En este caso el antígeno se encuentra disuelto, y al unirse los anticuerpos a los antígenos se forman unos macro complejos moleculares, formándose como una red tridimensional que debido a su tamaño precipita.
Técnica de precipitación
El complejo Ag-Ac precipita espontáneamente o por centrifugación cuando la proporción de Ags y Acs de la mezcla es equivalente. Laprecipitación es máxima donde la proporción entre ambos es óptima (parte central de la curva), pero va disminuyendo a medida que predomine el Ac o el Ag (izquierda y derecha de la curva respectivamente). Este tipo de reacción no es muy utilizado, al requerirse grandes concentraciones de antígeno y de anticuerpo para poder medir el precipitado formado.

Tipos de reacciones de precipitación

1.MEDIOS SOLIDOS
Utiliza como soporte agar de electrolitos, agar de alginatos, tiras de celulosa gelatinizada.

a) Difusión simple mono dimensional

Se coloca en un tubo de ensayo pequeño agar fundido, solución al 1% en cloruro de sodio 0,15 M, mezclado con un volumen igual del antisuero para analizar. Producida la solidificación, se añade la solución de antígeno. Por difusión a través delgel el antígeno va penetrando, creando un gradiente de concentración. En la interfase gel-liquido no se forman precipitados, dada la alta concentración antigénica, y aparecen con la forma de bandas cuando la concentración del antígeno que ha difundido es la óptima.
Si en el suero había más de un anticuerpo y en la solución añadida más de un antígeno que se correspondan, se formara tantas bandas deprecipitación como sistemas haya interaccionado.
Esto no es exacto, pues si se tiene en cuenta que dichas separaciones dependen de las velocidades de difusión de las diferentes moléculas antigénicas, solo será cierto si aquellas son distintas.

b) Difusión doble mono dimensional

En este caso la reacción se efectúa colocando en la parte inferior del tubo un volumen de agar al 1 % fundido,mezclado con partes iguales del antisuero. Producida la gelificación, se agrega agar al 0,5 % en solución salina, en un volumen igual a la mitad del anterior. Después de la solidificación se cubre todo con un volumen de agar al 1 % fundido, mezclado con igual volumen de la solución antigénica.
Antígenos y anticuerpos migrarán hacia la zona media e interaccionarán desencadenándose laprecipitación cuando las concentraciones sean las óptimas. Estando la difusión en relación directa con la concentración de la sustancia que difunde, la banda de precipitación estará más próxima a la zona del antígeno cuando hay exceso de anticuerpo, y ocurrirá lo inverso en caso contrario.
Este es un buen método cualitativo que permite demostrar varios sistemas reactivos simultáneos, cosa que no ocurre en laprecipitación en medios líquidos. Pueden detectarse hasta 10 µg/ml de anticuerpo.

c) Técnica de difusión radial doble de Ouchterlony o Difusión Doble Bidimensional
Esta técnica se realiza en placas de agar en donde se practican pocillos. En uno de estos pozos se coloca el suero o muestras a investigar y en el resto se coloca el anticuerpo, preparado frente a la sustancia que se quiere...