TÉCNICAS HISTOLÓGICAS

TEMA3 TECNICAS HISTOLOGICAS
Se denomina técnica histológica al conjunto de operaciones a que se somete una materia organizada, a fin de que sea posible su estudio por medio del microscopio, posibilitando la observación de estructuras no visibles al ojo humano.
PASOS GENERALES DE LAS TECNICAS HISTOLOGICAS
1. Obtención del material histológico para estudiar: Los tejidos se pueden obtener dediferentes formas:
Biopsia
Abiopsia
Necropsia (llamada vulgarmente autopsia)
2. Proceso de fijación: En este paso el tejido obtenido se coloca en una sustancia fijadora para evitar los cambios post-mortem Unos de los fijadores mas usado es el Formol al 10% (Formaldehido). En el caso de que utilicemos más adelante el microscopio electrónico, usaremos glutaraldehido (proteínas) u osmio (lípidos).
3.Lavados: Se debe lavar el tejido para quitar exceso de fijador
4. Deshidratación: Suena incoherente que se deba lavar el tejido y después deshidratarlo, entonces ¿para que lavarlo? El exceso de fijador al momento de la infiltración, incluso en la microtomia, podría afectar los cortes, por eso se debe lavar. La deshidratación se hace con el uso de alcohol de una menor concentración a una mayor.
5.Aclaramiento: En este paso el se sustituye el alcohol por un disolvente de parafina lo mas usado es el Xilol (Xileno) ya que como esta deshidratado el xilol entrara hasta la mas profundo del tejido. También el tejido pierde color hasta un tono acaramelado
6. Infiltración: En este paso la muestra se coloca en parafina liquida, cabe mencionar que se debe usar parafina histológica, como se ha dicho en elpaso anterior el tejido esta completamente lleno de xilol, ahora debido a osmosis sale el xilol y entra la parafina. La Deshidratación, Aclaramiento e Infiltración se pueden realizar manualmente pero hoy en día existe una maquina que lo puede realizar.
7. Inclusión: Aquí se forman bloques de parafina y dentro de estos bloques están las muestras a estudiar. hay maquinas especializadas para lainclusión en parafina de tejidos Después que se incluyeron los bloques y por consecuente se dejaron secar, estos se deben poner a enfriar en un congelador para su posterior corte
8. Microtomía: Se realizan cortes muy delgados que van de acuerdo a lo requerido o costumbre del laboratorio donde se realice la técnica, los cortes van desde .5 micras hasta 8 u 10 micras. Los cortes se echan al baño deflotación y se ´pescan´ con un portaobjetos, se marca con la fecha, el tejido que es y con que tinción se va a procesar. El ángulo de corte entre el cuchillo y el bloque ha de ser entre 10º y 15º. Una vez realizado el corte se da un baño de agua destilada, para que la parafina se estire. Un buen corte histológico debe tener un grosor en torno a 3-5 micras.
9. Tinción: Hay muchos tipos de tinciones paradiferenciar en los tejidos diferentes estructuras o sustancias; La tinción mas usada o también llamada "De Rutina" es la de Hematoxilina y Eosina (HyE) esta usa un colorante llamado Hematoxilina en su composición según Harris que tiñe las sustancias ácidas o que las contengan, como el núcleo que contiene el Ácido Desoxirribonúcleico (ADN) La Eosina Amarillenta tiñe las estructuras básicas como elcitoplasma y demás organelos

FIJADORES
Son sustancias que se utilizan para preservar la estructura del tejido semejante a la que tenían en vida; ya que los fijadores detienen la autolisis celular. La fijación tiene por objeto matar las células y conservarlas
Condiciones que debe tener un fijador:
Alto poder de penetración, para fijar las capas mas profundas
Actuar con rapidez, matando y fijandolas células
No provocar estructuras artificiales
No retraer el tejido, ni volverlos quebradizos
No debe dificultar la coloración y ejecución de cortes.
Conservar, en lo posible, los detalles estructurales que presentaban vivos.
TIPOS DE FIJADORES
FIJADORES QUIMICOS SIMPLES:
a) Formol al 10%, es el más usado. Su empleo es aconsejable en todos los casos en que no se disponga de un fijador...