Técnicas Inmunológicas
Páginas: 9 (2148 palabras)
Publicado: 31 de julio de 2011
TÉCNICAS INMUNOLÓGICAS
Se pueden realizar llevando a cabo una detección de antígenos específicos del patógeno o por la detección de secuencias específicas en los ácidos nucleicos del microorganismo. En cualquier caso requiere la utilización de técnicas específicas como la realización de sondas de ADN/ARN o la amplificación génica.
Además de estas técnicas diagnósticas, se pueden realizaruna serie de pruebas de sensibilidad a los antibióticos que serán francamente útiles a la hora de pautar un tratamiento contra la afectación.
Respecto a estas pruebas, debemos de tener en cuenta que las bacterias pueden adquirir genes de resistencia o experimentar mutaciones en su ADN que les confieran inmunidad frente a uno o más antibióticos. Para determinar si una cepa microbiana es sensible alos antibióticos se utilizan estas pruebas:
a) Técnica de difusión en agar (método de Kirby-Bauer).
Es una prueba estándar internacional. Se utiliza un inóculo bacteriano que incluye un número conocido de bacterias para sembrar un medio de cultivo (placa de Petri). Posteriormente, se depositan unos discos de papel impregnados con una concentración determinada de antibiótico.
Después, laplaca es incubada durante unas 24 horas para permitir el crecimiento bacteriano confluente. Alrededor del disco donde se difundió el antibiótico, la bacteria no crecerá (zona de no crecimiento), denominándose esta zona "halo de inhibición".
A continuación se mide el diámetro y se compara las medidas
estándar dadas para ese antibiótico. El tamaño del halo de inhibición permite determinar si elaislado clínico es sensible o resistente a un antibiótico.
b) Determinación del punto de corte (breakpoint )
Se determina si la especie bacteriana puede crecer o no en presencia de una concentración única de antibiótico considerada crítica para la multiplicación de esa especie bacteriana. Es la utilizada habitualmente en hospitales en los test automatizados.
c) Determinación de laConcentración Mínima Inhibitoria (CIM)
Es la mínima concentración de antibiótico que impide el crecimiento bacteriano visible a las 24 horas de cultivo.
Por último, una pequeña reseña sobre el diagnóstico de las infecciones causadas por hongos o virus.
a) Diagnóstico de las infecciones causadas por hongos:
Además del cultivo en Agar de Sabouraud (ya comentado anteriormente) se puede realizaruna observación al microscopio, que se da sobre todo cuando se realiza la inspección de hongos filamentosos, viéndose hifas (en las que miraremos el grosor, tabiques, ángulo de las ramificaciones) y cuerpos fructíferos (lugar de formación de esporas del hongo).
También se pueden realizar test bioquímicos, utilizando sobretodo hidratos de carbono o compuestos nitrogenados para identificarlevaduras, test inmunológicos, que detectarán antígenos específicos de algunas especies de hongos, e identificaciones genéticas mediante reacciones en cadena de la polimerasa.
b) Diagnóstico de las infecciones virales
Se realiza mediante la detección de antígenos en sangre y cultivos celulares, aunque también por la serología con detección de anticuerpos (teniendo en cuenta que una persona infectadava a sintetizar anticuerpos frente al virus que le ataca).
En los posibles cultivos, observaremos los ya conocidos efectos citopáticos y no debemos olvidar las identificaciones genéticas mediante reacciones en cadena de la polimerasa y las identificaciones por microscopía electrónica, aunque sean raramente usadas en la clínica.
-------------------------------------------------http://microral.wikispaces.com/9.+T%C3%A9cnicas+microbiol%C3%B3gicas+para+el+diagn%C3%B3stico+de+las+infecciones.
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Curso de Técnicas de Diagnóstico
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en Virología Animal
10.- Hibridización de Acidos Nucléicos y
PCR
Instituto de Virología - C.I.C.V. - INTA
REACCIÓN EN CADENA DE...
Se pueden realizar llevando a cabo una detección de antígenos específicos del patógeno o por la detección de secuencias específicas en los ácidos nucleicos del microorganismo. En cualquier caso requiere la utilización de técnicas específicas como la realización de sondas de ADN/ARN o la amplificación génica.
Además de estas técnicas diagnósticas, se pueden realizaruna serie de pruebas de sensibilidad a los antibióticos que serán francamente útiles a la hora de pautar un tratamiento contra la afectación.
Respecto a estas pruebas, debemos de tener en cuenta que las bacterias pueden adquirir genes de resistencia o experimentar mutaciones en su ADN que les confieran inmunidad frente a uno o más antibióticos. Para determinar si una cepa microbiana es sensible alos antibióticos se utilizan estas pruebas:
a) Técnica de difusión en agar (método de Kirby-Bauer).
Es una prueba estándar internacional. Se utiliza un inóculo bacteriano que incluye un número conocido de bacterias para sembrar un medio de cultivo (placa de Petri). Posteriormente, se depositan unos discos de papel impregnados con una concentración determinada de antibiótico.
Después, laplaca es incubada durante unas 24 horas para permitir el crecimiento bacteriano confluente. Alrededor del disco donde se difundió el antibiótico, la bacteria no crecerá (zona de no crecimiento), denominándose esta zona "halo de inhibición".
A continuación se mide el diámetro y se compara las medidas
estándar dadas para ese antibiótico. El tamaño del halo de inhibición permite determinar si elaislado clínico es sensible o resistente a un antibiótico.
b) Determinación del punto de corte (breakpoint )
Se determina si la especie bacteriana puede crecer o no en presencia de una concentración única de antibiótico considerada crítica para la multiplicación de esa especie bacteriana. Es la utilizada habitualmente en hospitales en los test automatizados.
c) Determinación de laConcentración Mínima Inhibitoria (CIM)
Es la mínima concentración de antibiótico que impide el crecimiento bacteriano visible a las 24 horas de cultivo.
Por último, una pequeña reseña sobre el diagnóstico de las infecciones causadas por hongos o virus.
a) Diagnóstico de las infecciones causadas por hongos:
Además del cultivo en Agar de Sabouraud (ya comentado anteriormente) se puede realizaruna observación al microscopio, que se da sobre todo cuando se realiza la inspección de hongos filamentosos, viéndose hifas (en las que miraremos el grosor, tabiques, ángulo de las ramificaciones) y cuerpos fructíferos (lugar de formación de esporas del hongo).
También se pueden realizar test bioquímicos, utilizando sobretodo hidratos de carbono o compuestos nitrogenados para identificarlevaduras, test inmunológicos, que detectarán antígenos específicos de algunas especies de hongos, e identificaciones genéticas mediante reacciones en cadena de la polimerasa.
b) Diagnóstico de las infecciones virales
Se realiza mediante la detección de antígenos en sangre y cultivos celulares, aunque también por la serología con detección de anticuerpos (teniendo en cuenta que una persona infectadava a sintetizar anticuerpos frente al virus que le ataca).
En los posibles cultivos, observaremos los ya conocidos efectos citopáticos y no debemos olvidar las identificaciones genéticas mediante reacciones en cadena de la polimerasa y las identificaciones por microscopía electrónica, aunque sean raramente usadas en la clínica.
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Curso de Técnicas de Diagnóstico
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en Virología Animal
10.- Hibridización de Acidos Nucléicos y
PCR
Instituto de Virología - C.I.C.V. - INTA
REACCIÓN EN CADENA DE...
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