T閏nicas Biol骻icas

PCR (Reacción en Cadena de la Polimerasa):
Método para conseguir un gran número de copias de fragmentos de ADN a partir de una única molécula de ADN, llamado “amplificación del ADN”.
1) Se diseñancebadores o primers que comiencen la síntesis de ADN en el punto deseado. Dos iniciadores comienzan la síntesis de ADN en direccione opuestas desde hebras opuestas (in vitro)
2) Se calienta el ADN a95º y por desnaturalización se separan las hebras.
3) Se busca luego una temperatura adecuada para el cebador se una a las hebras molde de ADN.
4) La ADN pol utiliza los cebadores para sintetizar lanueva hebra complementaria.
5) Se baja la temperatura (regulado por máquinas) y las hebras se re-naturalizan. Esto da la posibilidad de amplificar una sola molécula de ADN la cantidad de veces que senecesite.

Hibridación de Ácidos Nucleicos:
Método para detectar secuencias específicas de ácidos nucleicos mediante el apareamiento de bases entre hebras complementarias de ARN o ADN. Pueden hibridarentre sí dos hebras de ADN, dos hebras de ARN y una de ARN con otra de ADN.
1) Se somete a altas temperaturas (90-100ºC) a las hebras complementarias para que se desnaturalicen, dando moléculas decadena simple.
2) Cada molécula simple es incubada a 65ºC para que re-naturalice y formará moléculas de doble cadena por apareamiento de propias bases.
3) El ADN clonado puede ser marcado connucleótidos radioactivos o modificados que pueden detectarse por fluorescencia o quimioluminiscencia, antes de que se vuelvan a aparear las bases.
4) Este ADN marcado es después empleado como sonda para lahibridación con secuencias de ADN o ARN complementario, que luego pueden ser detectados mediante radioactividad, fluorescencia o luminiscencia de los híbridos de doble cadena resultantes

SouthernBlotting:
Técnica utilizada para la detección de genes específicos en el ADN celular.
1) El ADN con el que se está experimentando es digerido por una endonucleasa de restricción, y los pedazos obtenidos...