T15 Purificacion

Purificación de proteínas

Purificación
Proceso que cuenta con varias etapas cuyo objetivo es lograr la
concentración diferencial de la proteína o molécula de interés

Condiciones generales aevaluar
• Calidad (% de pureza del producto de acuerdo a mis
objetivos)
secuenciación, cristalización
ensayo de actividad, productos alimenticios médicos
• Cantidad técnicas de alta capacidad y de bajacapacidad
preparativas
analíticas
• Costos

Pasos a seguir en una purificación
1. Definir un ensayo específico que identifique a la proteína (actividad
biológica) (específico, sensible, rápido ybarato)
2. Elegir la fuente (matriz biológica)
3. Extraer la proteína de la fuente (proteínas intraceluares o
extracelulares)
4. Estabilización de la molécula
5. Aislamiento y concentración(fraccionamiento)
6. Determinar la pureza y calidad del producto final

1 Actividad Biológica

Cantidad de proteína que produce, por su acción biológica, un determinado cambio.

Este cambio puede ser:
• Un efectobiológico (Muerte celular, hemólisis, protección inmunológica)
• Variación en la cantidad de una sustancia química (producto de una reacción)

De esta forma podemos definir a la unidad de actividadbiológica como :

Una unidad de Actividad Biológica es la cantidad de proteína que produce una
determinada cantidad de “efecto”
1. Toxina
Una unidad de AB para una toxina es la cantidad de proteína queproduce la
muerte del 23% de los ratones de tal especie (siguen especificaciones…)
2. Enzima
Una unidad de AB para una enzima es la cantidad de proteína que produce 5.98
moles de producto en 1 minuto encondiciones …(siguen especificaciones…)

2 Elección de la Fuente

Matriz donde se encuentra la proteína de interés
• Concentración
• Accesibilidad
• Costo
• Facilidad de la extracción

3 Extracciónde la proteína de la fuente
Lisis osmótica: técnica muy suave. Uso de sn hipotónicas + fuerzas
mecánicas. Para bacterias y células vegetales: lisozimas u otras enzimas
Molienda: a. Morteros b....