Tabaco

El efecto combinado
de la sequía y el estrés
de choque térmico en
la expresión génica en
Tabaco

dmila Rizhsky, Hongjian Liang, y Ron Mittler

Introducción
 El efecto de un solo estrés en las plantas, puede ser muy diferente de las condiciones
encontradas por las plantas en el campo, en el que se producen muchas tensiones.
 Para el análisis de los mecanismos implicados en la respuesta de lasplantas a una
combinación de tensiones, se estudió el efecto de la sequía y los golpes de calor
simultáneamente sobre las plantas de tabaco.
 Una combinación de estos factores pueden representar las condiciones encontradas
por muchas plantas que crecen en entornos áridos; por lo tanto, su comprensión
puede ser crítica para el desarrollo de nuevas estrategias para mejorar la tolerancia al
estrésa través de la manipulación genética.

Materiales y métodos:
Condiciones de crecimiento y de
medición fisiológica
El crecimiento de las plantas de tabaco y los experimentos se llevaron a cabo en condiciones
ambientales controladas, a 23 ° C o 44 ° C. Las plantas fueron encapsulados individualmente
y se riegan con Solución de Hoagland. La iluminación fue continua, fue proporcionada por
lámparasfluorescentes de color blanco frío.
La actividad fotosintética, la respiración oscura, la temperatura de la hoja, y la conductancia
estomática se midieron con un aparato de LI-COR LI-6400.

Tratamientos de estrés
 El choque térmico se aplicó al elevar la temperatura en la cámara de crecimiento a 37
° C durante 1 h, seguido de otro aumento a 44 ° C durante 6 h. El estrés hídrico se
impusomediante la retirada de agua de las Todas las plantas, es decir, plantas
afectados por la sequía, las plantas bien regadas sometidas a choque térmico, las
plantas a la sequía y el calor, se mantuvieron a 23 ° C, se tomaron muestras al mismo
tiempo para el análisis. El estrés por frío fue impuesto por el cambio de la temperatura
en la cámara de crecimiento a 4 ° C por 48h. El estrés salino se induce alos 7 días de
edad durante 3 días.

Aislamiento de RNA
 El ARN total se aisló y se sometió a análisis de ARN de gel-blot. Se utilizó una sonda
para rRNA para garantizar la igualdad de carga de ARN.

Filtro gama de hibridación
 Los filtros se hibridaron con ADNc radiomarcados preparados a partir de ARN total
aislado de las diferentes plantas utilizando oligo-dT (primer) y transcriptasa reversa.Después de la hibridación y los lavados, las señales se analizan con una placa de
fósforo fotoestimulable y se analizaron con el software TINA. Cuando fue pertinente, el
nivel de expresión de genes específicos se verificó mediante Northern blot.

Resultados:
Caracterización fisiológica de estrés por una
combinación de sequía y choque térmico en
Tabaco

 La actividad fotosintética es suprimidadespués de la sequía o de una combinación de
la sequía y los golpes de calor, mientras que la
respiración se ve reforzada después de choque
térmico y una combinación de sequía y los
golpes de calor. Una combinación de sequía y
de choque térmico, por lo tanto, es diferente
de la sequía o de choque térmico por tener
una alta tasa de respiración y una baja tasa de
actividad fotosintética.

 Latemperatura de las hojas sometidas a
una combinación de sequía y el choque de
calor se demuestra que es mayor que la de
plantas sometidas a choque térmico en
ausencia de sequía. Esta diferencia puede
deberse a la incapacidad de las plantas,
para enfriar sus hojas por transpiración
debido a sus estomas están cerrados.

Caracterización molecular de la expresión
génica durante la sequía de estrés,choque
térmico, y una combinación de sequía y choque
térmico en Tabaco
 Se indujo un número de HSP durante una
combinación de sequía y de choque térmico.
En general, la inducción de HSP fue mayor en
la sequía y de choque térmico en comparación
con el choque de calor o sequía. El análisis de
los cambios en las enzimas de eliminación ROI
(intermediarios reactivos del oxígeno)
revelaron diferencias...