Taiga

INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL

ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLÓGICAS

QUÍMICO BACTERIÓLOGO PARASITÓLOGO

LABORATORIO DE FISIOLOGÍA Y BIOQUÍMICA MICROBIANA

Práctica No. 2
“Balance de Fermentación”

Grupo: 6QM3 Sección 1.

Equipo 2:
Andrade Ramírez Andrea
Carrera Pereda Gabriela
Hernández Medero Alicia Xareni
Sánchez Vázquez Mónica Edith

Profesoras:
Odilia García AquinoAnabel Romero Hernández
Susana Alfaro Aguilar
Antonia De Lira Torices

Balance de Fermentación

HIPOTESIS

La levadura Saccharomyces cerevisiae al entrar en condiciones de anaerobiosis producirá por medio de fermentación alcohólica dos moles de etanol y dos moles de bióxido de carbono por cada mol de glucosa consumida, teniendo un porcentaje de recuperación del carbono de alrededordel 100%.

DISEÑO EXPERIMENTAL

Se realizó un ensayo de fermentación usando a la levadura Saccharomyces cerevisiae que se sabe realiza la fermentación de tipo alcohólica; para ese proceso se requirió un matraz especial para estudios de fermentación que consta de una cámara principal, en la que se coloco la suspensión celular y regulador de fosfatos que será el que amortigüe los cambios en el pHdurante el proceso, y con un vaso central en el que se coloco NaOH como agente atrapante de CO2, a continuación se paso una corriente de N2 para desplazar al O2 y colocando un tapón de hule creamos un ambiente anaerobio; se inyectó la glucosa como fuente de energía para las células. Se dejo llevar a cabo la fermentación durante 30 minutos, comprobamos al observar burbujas alrededor del vasocentral, después de pasado el tiempo se inyectó ácido tricloroacético en dos ocasiones esto con el fin de detener la fermentación. Se recuperó la mezcla de fermentación de la cámara principal y se le agregó KOH para neutralizar al ácido tricloroacético y se lleva a un volumen de 10ml con agua destilada.
Para la determinación de etanol se realizó el método de Conway, usamos 3 cajas de Conway una parael testigo, otra para una muestra de 0.2ml y otra de 0.5ml; en la cámara central de la caja se coloco la alícuota correspondiente y K2Cr2O7 como agente atrapante que oxida el alcohol y lo convierte en ácido acético reduciendo al cromo, dando cierta coloración que podrá ser leída espectrofotométricamente; en la cámara externa se adiciona K2CO3 saturado como agente liberador, este hace que el etanolse vuelva menos volátil y pueda ser atrapado por el dicromato; se mezclo y se dejo incubar por media hora, al término de la incubación se recupero el dicromato residual, se diluyó con agua destilada, entre más etanol se haya atrapado menos color tendrá el dicromato.
Para determinar la glucosa se uso el método del DNS, en el que el ácido dinitrosalisilico es reducido por la glucosa dando uncompuesto colorido que fue leído por medio de espectrofotometría.
En el caso de la determinación de CO2 se uso un método gravimétrico en el que el contenido del vaso central fue depositado en un matraz al que previamente se le adiciono BaCl2, agente precipitante, que al reaccionar con el NaCO3 (producto de CO2 de la fermentación y el NaOH que contenía el vaso) se convierte en un precipitado deBaCO3, este se recupero por filtración, se seco por medio de una estufa y se peso, obteniendo así la cantidad de CO2 producido en la fermentación.

OBJETIVOS

* Comprobar que la levadura Saccharomyces cerevisiae realiza un proceso de fermentación alcohólica al entrar en condiciones anaerobias.
* Cuantificar los productos (etanol y CO2) producidos a partir de la fermentación.
* Realizarel balance de fermentación.
* Obtener el porcentaje de recuperación de carbono, así como el índice de óxido reducción de los productos de la fermentación.
* Comparar el porcentaje de carbono recuperado experimental, con el teórico esperado.
*

RESULTADOS

* Determinación de etanol

Tabla 1. Curva tipo de etanol
μg de etanol | Absorbencia(445 nm) |
0 | 1.139 |
250 |...