Taller Experimental

UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE CHIAPAS CENTRO DE BIOCIENCIAS
LICENCIATURA DE INGENIERO BIOTECNÓLOGO

UNIDADES DE HABILITACIÓN DE TALLER EXPERIMENTAL III

CUERPOS ACADÉMICOS DE BIOTECNOLOGÍA Y BIOTECNOLOGÍA AVANZADA

TAPACHULA, CHIAPAS, MÉXICO. 2009
CenBio UNACH

UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE CHIAPAS CENTRO DE BIOCIENCIAS LICENCIATURA DE INGENIERO BIOTECNÓLOGO

UNIDADES DE HABILITACIÓN DE TALLEREXPERIMENTAL III

PROFESOR RESPONSABLE: MC. J. ALFREDO VÁZQUEZ OVANDO

PROFESORES PARTICIPANTES: Dr. Pablo Jesús Montoya Gerardo

CONTENIDO

Práctica 1 Práctica 2 Práctica 3 Práctica 4 Práctica 5 Práctica 6 Práctica 7

Práctica 8 Práctica 9 Práctica 10

Normas de laboratorio Pigmentos vegetales Reconocimiento de biomoléculas Fenómenos de membrana-ósmosis Cuantificación de proteínas(métodos de Fenol-Folin o Lowry, de Bradford y espectrofotométrico) Construyendo un habitat Ciclo del carbono-Fotosíntesis Dinámica poblacional El frijolarium Poblaciones de lombrices Fotosíntesis: extracción, separación y cuantificación de pigmentos vegetales Aislamiento y purificación de una proteína Efecto de la concentración de enzima sobre la velocidad de reacción

4 5 8 14 17 22 24 24 26 31 3242 45

PRÁCTICA No. 1. Pigmentos vegetales Los pigmentos presentes en las plantas tienen diferentes funciones biológicas como la captación de luz, protección contra procesos oxidativos o simplemente confieren una tonalidad característica al tejido u órgano de la planta. Desde el punto de vista cuantitativo, la clorofila es el pigmento más importante en las plantas superiores. La clorofila seencuentra en las membranas tilacoidales de los cloroplastos y es responsable de la captación de luz en la fotosíntesis. La clorofila presenta en su estructura un anillo tetrapirrólico que es responsable de la absorción de la luz en la zona azul y roja del espectro, por lo que los tejidos donde este pigmento es muy abundante son de color verde (Figura 1).

Figura 1. Estructura de las moléculas declorofila a y b. El radical R1 es –CH3 en la clorifila a y –CHO en la clorofila b.

Los carotenoides representan un grupo muy importante de pigmentos vegetales que cumplen diversas funciones biológicas. Estos pigmentos derivan del isopentenil pirofosfato y son de color amarillo o naranja según el grado de oxidación de la molécula. Uno de los carotenoides más llamativos es el licopeno (Figura2), responsable del color rojo de los frutos de tomate y que se acumula en el interior del cloroplasto durante la maduración de los frutos.

Figura 2. Estructura de la molécula de licopeno

Estos pigmentos se han empleado como marcadores del grado de maduración de los frutos, proceso en el que tiene lugar la diferenciación del cloroplasto a cromoplasto, y asociado a ella, la degradación de laclorofila y la síntesis y acumulación de licopeno en el interior del plasto.

Objetivo: que el alumno pueda extraer y cuantificar la clorofila y el licopeno de frutos de tomate, así como determinar los espectros de absorción de estas biomoléculas.

Materiales y Métodos Tubos Nalgene® de 15 mL, Celdas de vidrio, Centrífuga de mesa, Espectrofotómetro, hexano:acetona (3:2) y Acetona Procedimiento1. Tomar aproximadamente 2 g de pericarpio de tomate y disgregarlo con una varilla de vidrio en el interior de un tubo Nalgene® de 15 mL. Anotar los pesos. 2. Por cada gramo de pericarpio, añadir 2 mL de la mezcla de disolventes orgánicos (hexano:acetona, 3:2). Tapar los tubos rápidamente, los disolventes son muy volátiles.

3. Agitar vigorosamente hasta completar la extracción de lospigmentos. 4. Centrifugar durante 5 minutos a 4000 rpm. 5. Recuperar la fase orgánica superior, que contiene los pigmentos, con pipeta Pasteur y pasarlo a otro tubo. Anotar los volúmenes. 5. Hacer un barrido y recoger los espectros de absorción de ambos pigmentos entre 400 y 700 nm. 6. Anotar la absorbancia a 502, 650 y 665 nm.

Después de la práctica, y para su reporte.

1. Calcular la cantidad de...