Taller Replicación
Páginas: 3 (534 palabras)
Publicado: 13 de agosto de 2012
CURSO BIOLOGIA CELULAR Y MOLECULAR
TALLER 1
Fecha: 29 marzo 2012
ESTUDIANTE: CODIGO:
Lea con cuidado el experimento 1 y conteste las preguntas
Experimento 1
El gendnaB de E. coli codifica una proteína llamada helicasa (dnaB). Esta proteína tiene la función de desenrollar el ADN para formar la horquilla de replicación. Sus propiedades han sido estudiadas enlaboratorio mediante el uso de sustratos artificiales (secuencias génicas) como los que se muestra en la figura 1.1.
En este experimento tres sustratos fueron incubados bajo diferentes condiciones y luegocada sustrato se sometió a electroforesis. La migración de la cadena simple de ADN (ADNs) se marcó radiactivamente y se visualizó por medio de una autoradiografía. Los resultados se presentan en laFigura 1.2
Para el sustrato 1, el hibrido sin colas, la helicasa no actúo, es decir el ADN no se desenrolló (Figura 1.2 líneas 1 y 2). Sin embargo, con los sustratos con colas (sustratos 2 y 3)fueron incubados a 37°C, con dnaB y ATP se liberaron fragmentos pequeños de ADN producto del desenrollamiento del ADN (líneas 6 y 10). Para el sustrato 3 solamente el fragmento 3` fue liberado, comoproducto de la acción de la helicasa. Todos los casos en donde hubo desenrollamiento del ADN se necesito adicionar ATP.
El desenrollamiento del ADN mejoró en los sustratos 2 y 3 cuando se adicionó laproteína SSB (single stranded-DNA binding protein). Compare las líneas 5 con la 6 y las líneas 9 con la 10). Vale la pena anotar que la proteína SSB debió agregarse 3 minutos después de la adición de lahelicasa (dnaB) para que el ADN se desenrollara.
Preguntas:
1. Por qué se requiere la presencia de ATP para que se produzca el desenrollamiento del ADN?
2. Que acción tiene el someter losdiferentes sustratos a un calentamiento mayor a 95◦C (heated)
3. Por qué la proteína SSB inhibe el desenrrollamiento del ADN si se adiciona antes de la proteína dnaB y por qué estimula este proceso...
TALLER 1
Fecha: 29 marzo 2012
ESTUDIANTE: CODIGO:
Lea con cuidado el experimento 1 y conteste las preguntas
Experimento 1
El gendnaB de E. coli codifica una proteína llamada helicasa (dnaB). Esta proteína tiene la función de desenrollar el ADN para formar la horquilla de replicación. Sus propiedades han sido estudiadas enlaboratorio mediante el uso de sustratos artificiales (secuencias génicas) como los que se muestra en la figura 1.1.
En este experimento tres sustratos fueron incubados bajo diferentes condiciones y luegocada sustrato se sometió a electroforesis. La migración de la cadena simple de ADN (ADNs) se marcó radiactivamente y se visualizó por medio de una autoradiografía. Los resultados se presentan en laFigura 1.2
Para el sustrato 1, el hibrido sin colas, la helicasa no actúo, es decir el ADN no se desenrolló (Figura 1.2 líneas 1 y 2). Sin embargo, con los sustratos con colas (sustratos 2 y 3)fueron incubados a 37°C, con dnaB y ATP se liberaron fragmentos pequeños de ADN producto del desenrollamiento del ADN (líneas 6 y 10). Para el sustrato 3 solamente el fragmento 3` fue liberado, comoproducto de la acción de la helicasa. Todos los casos en donde hubo desenrollamiento del ADN se necesito adicionar ATP.
El desenrollamiento del ADN mejoró en los sustratos 2 y 3 cuando se adicionó laproteína SSB (single stranded-DNA binding protein). Compare las líneas 5 con la 6 y las líneas 9 con la 10). Vale la pena anotar que la proteína SSB debió agregarse 3 minutos después de la adición de lahelicasa (dnaB) para que el ADN se desenrollara.
Preguntas:
1. Por qué se requiere la presencia de ATP para que se produzca el desenrollamiento del ADN?
2. Que acción tiene el someter losdiferentes sustratos a un calentamiento mayor a 95◦C (heated)
3. Por qué la proteína SSB inhibe el desenrrollamiento del ADN si se adiciona antes de la proteína dnaB y por qué estimula este proceso...
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