Tamaño De Primers

Diagnostico molecular

Diagnostico molecular
Universidad Juárez del estado de Durango Facultad de Agricultura y Zootecnia división de estudios de posgradosSarai Shesareli Mendoza Retana


Tamaño de primers
Sarai Shesareli Mendoza Retana


Tamaño de primers

Primers
Los oligonucleótidos iniciadores o primers son fragmentoscomplementarios que se van a unir a cada una de las dos cadenas separadas del templado de ADN. La selección de oligonucleótidos iniciadores es muy importante en la reacción en cadena de la polimerasa.De este paso depende el éxito en el laboratorio. En la tabla 1 se muestran los criterios principales a considerar para la selección adecuada de los primers.

Cuando el objetivo a amplificar es unlocus, la posición de los iniciadores debe ser relativa a los codones de inicio y terminación. Es recomendable que el cebador "forward" se encuentre más o menos a 35 pb del inicio de la secuencia quecodifica, de la misma forma el cebador "reverse" debe localizarse 35 pb despues de la región que codifica. Las concentraciones óptimas de los primers son generalmente entre 0.1 y 0.5 µM. Altasconcentraciones de primer pueden promover “mispriming” y acumulación de producto no específico y puede incrementar la probabilidad de generar un templado independiente llamado dímero deprimer. Los productos no específicos y los dímeros de primers son por si mismos sustratos para PCR y compiten con el producto deseado por la enzima, dNTPs y primers, resultando en un bajo rendimientodel producto deseado. Los primers pueden contener extensiones en el extremo 5’ o “mismatches” para incorporar sitios de enzimas de restricción, un codón de inicio ATG, o secuenciaspromotoras en la secuencia blanco. Pueden ser usados primers degenerados para extraer genes nuevos en base a su similitud o su secuencia de aminoácidos.
Especificidad
La especificidad de los...