taq polimerasa
T. aquaticus es una bacteria que vive en manantiales calientes y fuentes hidrotermales, y la polimerasa Taq que de ella se extrae ha sido caracterizada1 como una extremoenzima capaz desoportar las condiciones de alta temperatura requeridas durante el proceso de PCR sin desnaturalizarse.2 Por esta razón ha reemplazado a la ADN polimerasa proveniente de E. coli (Eco pol) que era la queoriginalmente se utilizaba en esta técnica, pero que requería ser reemplazada luego de cada ciclo de calentamiento aumentando las probabilidades de contaminación y prolongando los tiempos.3 Latemperatura óptima de funcionamiento de la Taq es de 75–80°C, con una semivida mayor a las dos horas a 92,5°C, 40 minutos a 95ºC y 9 minutos a 97,5ºC. Esta enzima puede replicar una cadena de ADN de 1000pares de bases en menos de 10 segundos funcionando a 72ºC de temperatura.4
Uno de los inconvenientes de la Taq es su relativamente baja fidelidad. Carece de actividad correctora de errores 5'→3'exonucleasa,4 y posee una tasa de introducción de errores de aproximadamente 1 cada 9.000 nucleótidos.5 Sin embargo los dos dominios restantes pueden actuar en coordinación por medio del movimiento acopladode dominios.6 Se han aislado algunas otras polimerasas de ADN de otras bacterias termofílicas y arqueas, tales como la polimerasa Pfu (aislada de Pyrococcus furiosus) que sí poseen actividadcorrectora de errores; estas polimerasas se utilizan solas o combinadas con la Taq cuando se requiere una amplificación de alta fidelidad.
La polimerasa Taq produce ADNs que poseen una adenina terminal no...
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