Tarea

.- Empaquetado de la columna:
1.- Con la llave de la columna cerrada añadir 5 mL de tampón fosfato, a continuación comenzar a añadir , usando una pipeta Pasteur, aproximadamente 20 mL desuspensión de gel, dejándola resbalar por la pared de la columna lentamente para evitar que se formen burbujas de aire en el interior de la columna. Agitar continuamente la mezcla de forma quepermanezca homogénea.
2.- Con el tiempo, el gel va sedimentando. Cuando alcance unos 2-3 cm de gel sedimentado se abre la llave permitiendo la salida del exceso de tampón, facilitando de esta manera elempaquetado. El gel empaquetado debe tener una altura de 10 cm. El lecho del gel debe quedar perfectamente uniforme y plano.
3.- Lavar bien la columna haciendo pasar aproximadamente 40 mL debuffer.
IMPORTANTE: en todo momento debe evitarse, mediante el control de la llave y la adición de tampón, que el gel llegue a secarse. La adición a la columna se hará siempre con pipeta Pasteur,con cuidado y por la pared para evitar distorsionar el lecho del gel.
C.- Medida del volumen de exclusión:
1.- Dejar fluir el tampón hasta que el menisco alcance el lecho del gel, evitando queéste se seque. Cerrar la llave.
2.- Añadir cuidadosamente con la pipeta Pasteur 2 gotas de la solución de azul de dextrano.
3.- Abrir la llave hasta que la banda de azul dextrano entrecompletamente en el gel y cerrar de nuevo. Añadir a la parte superior del gel un poco de tampón (2 cm de altura).
4.- Poner un tubo graduado de 50 mL para recoger el líquido que sale de la columna(eluído). Abrir la llave, dejar entrar la capa de tampón en el gel.
5.- Continuar añadiendo más tampón a la columna hasta que la banda azul salga por abajo. Anotar el volumen recogido cuando salga dela columna el centro de la banda de azul dextrano. Este es el volumen de exclusión de la columna.
6.- Lavar la columna haciendo pasar tampón hasta la completa eliminación del azul dextrano