tecmed

Universidad de Concepción
Facultad de Medicina
Tecnología Médica
Bioanálisis Clínico Hematología y Banco de Sangre


Informe de laboratorio

Practico N°1, N°2 y N°3:
DETERMINACION DE VIRUS RESPIRATORIOS POR INMUNOFLUORESCENCIA DIRECTA Y LECTURA EN MICROSCOPIO DE EPIFLUORESCENCIA

TOMA Y ENVIO DE MUESTRAS PARA PEQUIZA DE Bordetella pertussis



Alumno: Alonso Gutiérrez Salgado.Profesor(a): TM. Nancy Rivera Fuentes y TM. Emerson Chandia.
Asignatura: Parasitología
Fecha de entrega: 04-09-2012.

Indice

Introducción………………………………………………………………….3
Práctico N°1…………………………………………………………………4
Práctico N°2…………………………………………………………………6
Práctico N°3…………………………………………………………………8
Conclusión………………………………………………………………….10

Introducción:
La s infecciones respiratorios son una frecuenteenfermedad en distintas edades, pero principalmente manifestándose en niños y con mayor incidencia aun, en periodo de invierno. Para el clínico es fundamental tener un diagnóstico de laboratorio claro que apoye su teoría y permita un buen tratamiento para la mejora del paciente o bien tomar las medidas adecuadas cuando se habla de casos mas graves. Para esto hoy en día se trabaja con técnicasmicroscópicas que permiten evidenciar el tipo de virus con el que se está tratando, considerando dentro de las posibilidades una batería serológica estándar para 5 o 6 virus diferentes, que son virus respiratorio sincicial, virus influenza A, influenza B, virus parainfluenza, virus adenovirus y actualmente el metapneumovirus.
Las técnicas más utilizadas hoy en día son inmunofluorescencia directa (IFD)e inmunofluorescencia indirecta (IFI), que constan principalmente de un método de marcado del antígeno viral con anticuerpos adecuados y unidos a estos unas moléculas denominadas fluorocromos, los cuales se caracterizan por emitir fluorescencia ante una luz incidente.
Previamente a la observación se realiza fijación de frotis y tinción con sustancias antígenas adecuadas, las cuales ayudaran adiferenciar el tipo de virus que posiblemente se encuentre como agente patógeno. Posteriormente para el procedimiento se utiliza el microscopio de epifluorescencia, instrumento que funciona a partir de la estructura convencional del microscopio de luz, pero con una herramienta lumínica desmontable y altamente sofisticada, que con la ayuda de espejos, redirige su luz hacia la muestra en observación.Los colores que representa cada célula son rojo brillante totalmente para células no infectadas con virus, y verde manzana brillante en el interior de célula, que evidencian la presencia de un complejo antígeno-anticuerpo.

Además del fin anterior la IFD es un método útil para distinguir otros tipos de microorganismos patógenos intracelulares, la Bordetella pertussis, agente causal de la tosconvulsiva o coqueluche, que manifiesta una creciente incidencia en el tiempo actual y en laboratorio se necesita personal muy calificado para diagnosticar correctamente su presencia. Los colores que el frtis presenta varia entre intensidades de verdes oscuros, encontrándose entre ellos unas pequeñas partículas de color verde mas claro.

Practico N°1:
DETERMINACION DE VIRUS RESPIRATORIOS PORINMUNOFLUORESCENCIA DIRECTA (I.F.D.)
Principio y método de medición:
La técnica utilizada durante esta actividad es inmunofluorescencia directa, para lo que se debe procesar correctamente la muestra, preparar un frotis y teñir adecuadamente.

Materiales:
-Pipeta Pasteur plástica
-Solución buffer fosfato salino, pH 7,2 (PBS)
-Acetona anhidra
-Antisueros monoclonales para cada tipo de virus-Antisuero policlonal para screening
-Tubos para aspirado nasofaríngeo Nunk
-Portaobjetos de fondo azul de 8 pocillos
-Centrífuga
-Caja oscura (para almacenamiento correcto)
-Cámara húmeda (Cámara de plumavit con toalla muy húmeda y dos barritas de soporte para posicionar los portaobjetos)

Muestra:
La muestra proviene de un paciente con patología respiratoria, fue extraída por aspirado...