tecnica de blotting

Técnica de Blotting

La técnica de transferencia (blotting) se basa en el mismo fundamento que la auto radiografía, y permite identificar la presencia de una banda concreta en un gel deelectroforesis, bien sea de proteínas o de ácidos nucleico. Si se trata de proteínas, la técnica se llama a) Western blot. Se utilizan anticuerpos marcados con radioactividad para identificar cuál es la bandaque presenta la proteína que me interesa localizar. b) Si se trata de DNA, la técnica se llama Southern blot. Se utilizan sondas de DNA (moléculas de DNA marcadas con radioactividad y con una secuenciaconocida) para identificar qué bandas del gel contienen secuencias complementarias a la de la sonda. c) Si se trata de RNA, la técnica se llama Northern blot. Se utilizan sondas de RNA (moléculas deRNA marcadas con radioactividad y con una secuencia conocida) para identificar qué bandas del gel contienen secuencias complementarias a la de la sonda. Los pasos para realizar este procedimiento son:1) Electroforesis: Se separan las proteínas o los ácidos nucleicos en un gel de electroforesis. Con proteínas se utiliza un gel de poliacrilamida. Con ácidos nucleicos se utiliza un gel de agarosa. 2)Transferencia (Blotting): Se transfieren las bandas de proteínas o de ácidos nucleicos desde el gel hacia una membrana de nitrocelulosa (flechas azules) para que puedan reaccionar con la sondaradioactiva. 3) Auto radiografía: Se añaden Anticueros radiactivos contra una proteína o sondas radioactivas de ácidos nucleicos (con secuencia conocida). Se espera a que reaccionen (A). Se coloca lamembrana de nitrocelulosa sobre una placa fotográfica y se revela (B). Aplicaciones: El northern Blot permite observar un patrón particular de expresión genética entre tejidos, órganos, estadios deldesarrollo, niveles de estrés ambiental, infecciones causadas por patógenos y durante el curso del tratamiento de las mismas. Esta técnica se ha utilizado para mostrar la sobre expresión de oncogenes y la...